[发明专利]一种多重引物的PCR方法及其反应液和在制备检测试剂中的应用

摘要

本发明涉及一种多重引物的聚合酶链式反应方法及其反应液和在制备微生物检测试剂中的应用，特别涉及在PCR过程中采用92－97℃和65－87℃两种变性温度分别进行最初2或3个循环和其他后续循环，克服了现有的针对同一DNA链的多重PCR中正反引物间相互非专一性配对扩增，形成非特异产物的缺陷。通过合适的产物设计和两种变性温度的设置，显著降低了PCR前期合成的非目标产物参与后续循环的可能性，适用于制备单管式多重PCR快速检测试剂，在乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒、人乳头瘤病毒等病毒各种变异株、血清型、基因型或其亚型检测和结核杆菌等细菌耐药基因检测等方面有良好的应用前景。

主权项

1.一种多重引物的聚合酶链式反应方法，由2对以上引物同时针对模板DNA链进行如下反应：(1)模板变性；(2)引物退火；(3)DNA聚合酶催化下延伸合成互补DNA链；(4)按步骤(1)-(3)循环进行扩增反应；其特征在于，模板变性温度在前2或3个循环为92-97℃，在后续的循环中为65-87℃。