[发明专利]高产能的L－谷氨酰胺发酵方法

摘要

本发明提供一种高产能的L－谷氨酰胺发酵方法，是在黄色短杆菌发酵周期短的基础上，经过潜心研究，把传统的富集培养法运用于抗性菌筛选中，高效率的选育出产能强的优势菌株，又在发酵中以最大的限度强化和保持菌体产酸能力为中心提出一整套保证发酵产能高的发酵控制方法，具有发酵周期短，发酵产率高等特点。

主权项

1、一种高产能的L-谷氨酰胺发酵方法，其工艺如下：(1)筛选抗性菌：该工艺又包括如下工序：A制备完全培养基，其组成有：牛肉膏1.0％、蛋白胨1.0％，酵母膏0.3％、NaCl0.5％，pH值为7.0-7.2；B制备基本培养基，其组成有：葡萄糖2％、硫酸铵1％、脲0.2％、磷酸二氢钾0.1％、磷酸氢二钾0.3％、硫酸美0.1％、硫酸铁0.001％、生物素5微克/升、硫胺素100微克/升、琼脂粉1.5％-1.8％，pH值为7.0-7.2；C制备磷酸盐缓冲液：用61毫升浓度为23.9克/升的十二水磷酸氢二钠和39毫升浓度为10.4克/升的二水磷酸二氢钠混合，并稀释成200毫升即可，该磷酸盐缓冲液的pH值为7.0；D诱变处理：取已活化的完全培养基斜面菌苔，接入装有30毫升磷酸盐缓冲液及玻璃珠的250毫升三角瓶中，振摇15分钟左右，使菌体分散成单细胞，然后加入事先溶解的亚硝基胍，使菌体的浓度为200-1000微克/毫升，于30℃恒温振摇15-30分钟，30分钟后菌体的死亡率为90％-99.99％，处理完毕后吸0.5毫升菌液到完全培养基中，用250毫升三角瓶盛液25毫升，在30℃恒温下培养1-2天，待菌液明显浑浊，离心收集菌体，用磷酸盐缓冲液洗2次，制成菌悬液，用玻璃珠分散成单细胞后不稀释，取0.1-0.2毫升涂布于基本培养基上，在30℃恒温下培养3-10天，把3-5天后长出的大菌落挑出，转接于完全培养基斜面上，筛选出SGrNO18；(2)发酵处理该工艺包括如下工序：a制备种子培养基其组成为：葡萄糖3-4％、脲0.3-0.5％、磷酸二氢钾0.1％、磷酸氢二钾0.3％、玉米浆3-4％，PH值为7.0-7.2；b制备发酵培养基其组成为：葡萄糖14％、磷酸二氢钾0.25％、硫酸镁0.05％、硫酸锰10毫克/升、硫酸锌1.0毫克/升、硫酸铜1.0毫克/升、硫胺素1.0毫克/升、玉米浆0.7-1.4％、硫铵7％，PH值7.0-7.2；c将黄色短杆菌SGrNO18在完全培养基斜面上活化18-24小时，接种于种子培养基中，并于30-32℃恒温下振荡培养7-9小时作为种子液，将上述种子液0.5-1.0升接入500-700升种子罐，于30-32℃通气搅拌培养7-9小时，然后在5吨发酵罐中好氧发酵，接种量为5-15％，在发酵过程中，通氨控制pH5.5-7.5，在搅拌转速不变的条件下，加大或减少通氨量使溶氧在0-100％，湿菌体7-13克/100毫升发酵液，糖耗速率为0.2-1.0％，并适时补充葡萄糖和补充生物素。