[发明专利]Y染色体复合扩增银染试剂盒

摘要

一种Y染色体复合扩增银染试剂盒，其特征是由分离包装的短引物YPA、短引物YPB、缓冲液(无Mgcl2)、DNA聚合酶、Mgcl2、A基因座长引物YPA－A－P1和A基因座长引物YPB－A－P2、B基因座长引物YPA－B－P1和B基因座长引物YPB－B－P2、C基因座长引物YPA－C－P1和C基因座长引物YPB－C－P2、D基因座长引物YPA－D－P1和D基因座长引物YPB－D－P2以及人工等位基因分型标准物构成。本发明对试剂盒内的引物进行了设计，从而能够高效率地同时对Y染色体上的任意四个STR基因座进行复合扩增，并可以方便地采用硝酸银染色方式检测扩增结果，对实验设备的成本要求不高，符合当前中国大多数分子生物学实验室的需要，具有中国特色。

主权项

1、一种Y染色体复合扩增银染试剂盒，其特征是由分离包装的短引物YPA、短引物YPB、缓冲液(无Mgcl2)、DNA聚合酶、Mgcl2、A基因座长引物YPA-A-P1和A基因座长引物YPB-A-P2、B基因座长引物YPA-B-P1和B基因座长引物YPB-B-P2、C基因座长引物YPA-C-P1和C基因座长引物YPB-C-P2、D基因座长引物YPA-D-P1和D基因座长引物YPB-D-P2以及人工等位基因分型标准物构成，其中：短引物YPA、YPB为非人类的基因组序列：YPA：5′--ATTTAGGTGACACTATAGAATAC-3′；YPB：5′--TAATACGACTCACTATAGGGAGAC-3′；A基因座长引物YPA-A-P1和A基因座长引物YPB-A-P2为分别在能够与人类的A基因座的基因组序列特异性结合的寡核苷酸引物P1、P2的5′端加上所述短引物YPA、YPB而得到的基因组序列；B基因座长引物YPA-B-P1和B基因座长引物YPB-B-P2为分别在能够与人类的B基因座的基因组序列特异性结合的寡核苷酸引物P1、P2的5′端加上所述短引物YPA、YPB而得到的基因组序列；C基因座长引物YPA-C-P1和C基因座长引物YPB-C-P2为分别在能够与人类的C基因座的基因组序列特异性结合的寡核苷酸引物P1、P2的5′端加上所述短引物YPA、YPB而得到的基因组序列；D基因座长引物YPA-D-P1和D基因座长引物YPB-D-P2为分别在能够与人类的D基因座的基因组序列特异性结合的寡核苷酸引物P1、P2的5′端加上所述短引物YPA、YPB而得到的基因组序列；人工等位基因分型标准物共包括了A基因座分型标准物、B基因座分型标准物、C基因座分型标准物和D基因座分型标准物：A基因座分型标准物为A基因座的长引物YPA-A-P1、YPB-A-P2经聚合酶链式反应所得产物，且长引物YPA-A-P1、YPB-A-P2经PCR扩增所得产物各占其总重量的二分之一；B基因座分型标准物为B基因座的长引物YPA-B-P1、YPB-B-P2经聚合酶链式反应所得产物，且长引物YPA-B-P1、YPB-B-P2经PCR扩增所得产物各占其总重量的二分之一；C基因座分型标准物为C基因座的长引物YPA-C-P1、YPB-C-P2经聚合酶链式反应所得产物，且长引物YPA-C-P1、YPB-C-P2经PCR扩增所得产物各占其总重量的二分之一；D基因座分型标准物为D基因座的长引物YPA-D-P1、YPB-D-P2经聚合酶链式反应所得产物，且长引物YPA-D-P1、YPB-D-P2经PCR扩增所得产物各占其总重量的二分之一；各组份的用量比为：短引物YPA0.25～0.35ml(400nM)、短引物YPB0.25～0.35ml(400nM)、缓冲液(无Mgcl2)3.5～4.0ml、DNA聚合酶3000u(3u/μl)、Mgcl22.5～3.5ml(2.25mM)、A基因座长引物YPA-A-P1和A基因座长引物YPB-A-P2各0.25～0.35ml(40nM)、B基因座长引物YPA-B-P1和B基因座长引物YPB-B-P2各0.25～0.35ml(40nM)、C基因座长引物YPA-C-P1和C基因座长引物YPB-C-P2各0.25～0.35ml(40nM)、D基因座长引物YPA-D-P1和D基因座长引物YPB-D-P2各0.25～0.35ml(40nM)、人工等位基因分型标准物4ml(40nM)，在人工等位基因分型标准物中，A基因座分型标准物1ml(40nM)、B基因座分型标准物1ml(40nM)、C基因座分型标准物1ml(40nM)、D基因座分型标准物1ml(40nM)。