[发明专利]异种骨胶原基质制备的新方法

摘要

本发明涉及骨外科修复材料和骨组织工程细胞外基质材料等生物材料技术领域，具体是一种异种骨胶原基质制备的新方法。本方法选取牛、猪等异种骨，主要经异种骨来源和加工—脱脂处理—部分脱钙—脱非胶原蛋白—蛋白酶消化，最后消毒包装得新型的异种骨胶原基质，该材料保留了原骨的骨矿成分和大部分胶原蛋白，其中的胶原成分经蛋白酶消化后，切除了能够引起免疫原性的端肽，因而免疫原性大大降低。在具有较强力学性能的同时，该材料具有较好的孔隙率和孔道连通，适合用作骨组织工程细胞外基质材料和骨缺损移植材料，为骨移植外科和骨组织工程的发展提供廉价的生物材料。

主权项

1.一种异种骨胶原基质制备的新方法，其特征在于：采用一系列生物和化学方法对牛、猪等异种骨进行处理，过程如下：(1)异种骨材料的来源和加工选取新鲜的牛或猪的腿骨，经充分去除软组织、软骨和骨髓后，洗净，冷冻，切割分离干骺端，将骨骺端松质骨加工成块状，其长轴与骨小梁的排列方向保持一致，骨干中部加工成圆柱体或条形；(2)脱脂处理加工好的骨块用40～60℃压力水反复冲洗，然后用0.01～5mol/L碱液室温浸泡24h，将骨块用脱脂剂于50～60℃下脱脂48～72h，每24h将骨块取出在离心机上以4000转/分钟的速度离心30分钟左右，清除骨块内细胞成分和脂肪等物质；(3)部分脱钙处理骨块在0.1～5mol/L酸性溶液中室温下部分脱钙5～10分钟，再用双蒸水反复透析至pH值为6，以去除残留的酸液；(4)脱非胶原蛋白骨块放入含有pH值为7.4的非胶原蛋白脱除剂的混合液中，该混合液的组成为含氮碱性有机物、Tris缓冲液和盐类，置于4℃的冰箱中脱除非胶原蛋白，时间为24h；(5)蛋白酶消化骨块用0.05～0.5％的蛋白酶消化，加入少量巯基酶抑制剂防腐，用缓冲溶液控制溶液的pH为7.8～8.0，骨液比为1∶1～1∶6，在37℃条件下消化48h，再用4mol/LNaCl浸泡12～24h，以脱除溶解的非胶原蛋白和部分胶原蛋白；(6)消毒和包装