[发明专利]可逆光致变色藻胆蛋白的制备方法

摘要

本发明公开了一种可逆光致变色藻胆蛋白的制备方法，通过基因工程表达可逆光致变色藻胆蛋白的脱辅基蛋白、相应的催化藻蓝胆素从藻蓝蛋白裂解的藻蓝蛋白裂合酶、相应的催化藻胆蛋白脱辅基蛋白与藻胆色素共价偶联的藻红蓝蛋白裂合/异构酶，然后应用此裂合酶、此裂合/异构酶催化藻蓝胆素从藻蓝蛋白及其α亚基转移，并同时与藻胆蛋白脱辅基蛋白体外重组，从而制备可逆光致变色的藻胆蛋白。本发明方法中，整个反应过程不涉及使用有机溶剂和去污剂，只使用蛋白质与水溶液，是一种环境友好的绿色生产工艺。因此，此可逆光致变色藻胆蛋白制备方法更适合应用于食品、保健与医药功能领域中。

主权项

1.一种可逆光致变色藻胆蛋白的制备方法，其步骤为：(1)采用基因工程方法，分别将pecE和pecF克隆于表达载体中，将此重组表达载体分别转入大肠杆菌，从而得到相应的大肠杆菌工程菌，应用此工程菌生产PecE与PecF；(2)将PecE与PecF混合，得到藻红蓝蛋白裂合/异构酶PecE/F；(3)采用基因工程方法，分别将pcE和pcF克隆于表达载体中，将此表达载体分别转入大肠杆菌，从而得到相应的大肠杆菌工程菌，应用此工程菌生产PcE与PcF；(4)将PcE与PcF混合，得到藻蓝蛋白裂合酶PcE/F；(5)应用基因工程方法表达PecA类脱辅基蛋白；(6)将步骤2得到的PecE/F、步骤4得到的PcE/F、步骤5得到的脱辅基蛋白与PC或α-PC混合，按如下反应条件反应：反应温度20～45℃，pH值7～8.5；反应所需的辅助因子包括：①二价锰离子、镁离子或钙离子中的一种或几种，其总浓度为1～5mmol/L，和②巯基乙醇、二硫苏糖醇、还原型谷胱甘肽或其它巯基化合物中的一种或几种，其总浓度为2～10mmol/L。