[发明专利]核酸扩增检测方法

摘要

核酸扩增检测方法，包括向检测样品中加入至少一种线状探针和至少一种环状探针，二者的摩尔浓度比在1∶100至100∶1的范围内；其中，线状探针至少包含：(1)5’端与靶核酸配对的序列；(2)3’端与环状探针配对的短序列；环状探针至少包含：(1)与靶核酸配对的序列；(2)与线状探针3’端配对的序列；(3)用于调节环状探针总长度的填充序列。本发明方法可在同一反应管内，只用一种DNA聚合酶，通过一步恒温反应完成核酸杂交、扩增、检测等多项操作，可在约一小时内将DNA量扩增1010倍以上，检测灵敏度达到单拷贝水平，没有产物交叉污染，适用于检测RNA和DNA。可用来检测各种生物样品中是否有指定的核酸序列存在及定量地测出其浓度。

主权项

1.一种核酸扩增检测方法，该方法包括：向被检测样品中加入核酸探针及其他公知的必要辅助成分，在设定温度下进行扩增反应，在反应进行中或完成后用仪器检测扩增信号并定量分析靶核酸，据分析结果判断样品中是否存在靶核酸并确定其浓度，其特征在于，上述的核酸探针是至少包括一种线状探针和一种环状探针的探针组，其中，线状探针与环状探针的摩尔浓度比在1∶100至100∶1的范围内；其中，线状探针至少包含如下两个部分：(1)5’端与靶核酸配对的序列，其长度在15-35个核苷酸的范围内；(2)3’端与环状探针配对的短序列，其长度在2-10个核苷酸的范围内；并且上述(1)和(2)两部分之间的间隔在0-5个核苷酸的范围内；环状探针的总长度在35-200个核苷酸的范围内，其中至少包含如下3个部分：(1)与靶核酸配对的序列，其长度在15-35个核苷酸的范围内；(2)与线状探针3’端配对的序列，其长度在2-10个核苷酸的范围内；(3)用于调节环状探针总长度的填充序列；并且上述(1)和(2)两部分之间的间隔在0-5个核苷酸的范围内。