[发明专利]一种节瓜雌性基因的分子标记方法

摘要

本发明是一种节瓜雌性基因的分子标记方法，它涉及节瓜全雄株系、全雌株系的选育与保持方法，以及利用节瓜全雄株系、全雌株系进行雌性基因分子标记的方法。该方法利用改良CTAB法从节瓜全雌株系与全雄株系杂交分离后代中快速提取全雌DNA和全雄DNA，采用BSA法对节瓜性型基因进行标记，扩增反应的热循环条件：94℃，1min；36℃，2min；72℃，1min；5个循环后改为94℃，0.5min；36℃，1min；72℃，1.5min；35个循环后于72℃延伸10min。

主权项

1.一种节瓜雌性基因的分子标记方法，其特征是，它包括如下步骤：第一步全雌株系的获得和保持：从节瓜强雌株中经多年自交，定向选择，选育出节瓜全雌株，全雌株在3～5片真叶期喷施AgNO3，诱导产生雄花，然后进行自交，从而获得节瓜全雌株系种子，进而使得节瓜全雌株系得到保持和延续；第二步全雄株系的获得和保持：从节瓜强雄株中经多年自交，定向选择，选育出节瓜全雄株，全雄株上的雄花与其同亲缘的强雄株上的雌花进行杂交，从而获得节瓜杂交种子，从F1中自交后可分离出全雄株，进而使得节瓜全雄株系得到保持和延续；第三步全雌株、全雄株的获得：利用纯合的节瓜全雌株系与全雄株系进行杂交，获得F1种子，种植F1种子，可获得分离世代的F2植株，从中可筛选出全雌株、全雄株；第四步全雌株DNA、全雄株DNA的获得：分别取7～10株全雌株、全雄株，混合取样，按CTAB法提取全雌株、全雄株DNA；第五步分子标记反应体系：RAPD反应总体积25μl，含2.5mmol/L的MgCl2，模板DNA20～30ng，扩增反应的热循环条件：94℃，1min；36℃，2min；72℃，1min；5个循环后改为94℃，0.5min；36℃，1min；72℃，1.5min；35个循环后于72℃延伸10min；取8～10μl反应产物，与2μl溴酚蓝混匀，点入含0.5mg/LEB的1.0％琼脂糖凝胶中，在5V/cm电场强度下电泳2～3小时，取出凝胶，采用紫外凝胶分析系统进行分析。