[发明专利]一种家蚕体中提取多肽抗生素的制备方法

摘要

本发明公开了一种利用家蚕提取多肽抗生素的制备方法，其步骤为：家蚕幼蚕和蚕蛹多肽抗生素的诱导，家蚕多肽抗生素粗提液的制备，家蚕多肽抗生素的分离纯化。本发明工艺简单，原料来源广泛，成本低廉，抗菌谱广，纯度高，具有一定的社会、经济和生态环保效益。

主权项

1、一种家蚕体中提取多肽抗生素的制备方法，它包括下列步骤：A、家蚕的诱导，首先是幼虫的诱导：在幼虫提取的前五天，以2％～10％浓度的微生物培养液喷洒桑叶后饲喂4～5龄期的家蚕，每天1次，连续4天，同时，采用超声波诱导，条件是10～20千赫处理2～5小时，间隔20～24小时重复诱导3次，诱导后的幼蚕幼虫于0～12℃低温下储藏；其次是蚕蛹的诱导，以2％～10％浓度的微生物培养液喷洒桑叶后饲喂4～5龄期的家蚕，每天1次，直至家蚕吐丝；待结茧后第3-5天，采用10～20千赫超声波进行处理，每天1次，每次2～5小时，间隔20～24小时重复诱导3次，诱导后的蚕茧于0～12℃下储藏；B、家蚕多肽抗生素粗提液的制备，首先是将诱导好的幼虫、鲜蛹或鲜茧缫丝后的蚕蛹，加2～3倍体积的0.2mol/L磷酸盐缓冲液，pH5-7，放入组织捣碎匀浆机中，匀浆10min；其次是将所得匀浆液于4℃，12000r/min离心15min，取上清液，于4℃下放置12小时；第三是将抽提液于40～80℃水浴中处理25min，置超低温冰箱中冷却10min后，4℃，12000r/min离心10min，取上清；第四是将上清液用25％，80％硫酸氨进行分级沉淀，在沉淀的同时用碳酸钠调pH9.5-10.5，静置10min后，4℃，15000r/min离心15min，所得沉淀用缓冲液进行溶解，再按照上述方法离心，得上清液；第五是将上清液透析除盐24小时，透析袋每隔三小时换水一次；C、家蚕多肽抗生素的分离纯化，首先是分子筛柱层析，上清液经透析处理后，上葡聚糖G-75分子筛柱，平衡液为0.2mol/L磷酸盐缓冲液，pH5-7，洗脱液为0.5～1.0mol/L磷酸盐缓冲液梯度洗脱，pH5-7；其次是收集活力峰，将收集的溶液进行-20℃--80℃真空干燥得家蚕多肽抗生素的活性干粉；第三是上制备型高效液相色谱柱，10～50％的乙腈洗脱，收集活性峰；第四是活力峰冻干，于零下20℃保存，得到多肽抗生素。