[发明专利]钙调素结合型蛋白激酶基因的制备方法及在水稻中的应用

摘要

本发明公开了一种钙调素结合型蛋白激酶基因的制备方法和它在水稻中的应用。其步骤为：A.用BamHI酶切已克隆到的钙调素结合蛋白激酶基因；B.将A步获得的基因连接到中间载体pAHC17上，形成pAHC17－R19(+)；C.用HindIII，EcoRI双酶切pAHC17－R19(+)，并连接到同样双酶切的表达载体pCAMBIA1300或pCAMBIA1301上，使得钙调素结合蛋白激酶基因置于泛素启动子和NOS尾巴之间，形成可转化或表达的载体；D.将制备的载体转入农杆菌EHA105，再导入成熟胚诱导的水稻愈伤组织中；E.筛选阳性植株。本发明的钙调素结合蛋白激酶基因在水稻中的应用。该转基因植物表现晚开花状，生长期延长，千粒重增加，可以提高单位面积产量。

主权项

1、一种钙调素结合型蛋白激酶基因的制备方法，包括下列步骤：A.用BamHI酶切已克隆到的钙调素结合蛋白激酶基因；B.将A步获得的基因连接到中间载体pAHC17上，形成pAHC17-R19(+)；C.用HindIII，EcoRI于37℃双酶切pAHC17-R19(+)，并连接到同样双酶切的表达载体pCAMBIA1300或pCAMBIA1301上，使得钙调素结合蛋白激酶基因置于泛素启动子和NOS尾巴之间，形成可转化或表达的载体；D.将制备的载体通过制备的农杆菌EHA105感受态转化进入农杆菌EHA105，再导入成熟胚诱导的水稻愈伤组织中；E.筛选阳性植株.将愈伤转入选择培养基26℃黑暗培养两周，转入新的选择培养基再培养两周，将抗性愈伤转入预分化培养基中26℃黑暗培养一周后，转入分化培养基中于4000Lux下，26℃培养至诱导的绿芽3-4cm，转入生根培养基中生根，长出根系后，将再生植株转入培养钵中荫处培养4-5天，最后转入大田中培养至成熟。