[发明专利]一种重组改构人肿瘤坏死因子的生产方法无效
| 申请号： | 03129262.3 | 申请日： | 2003-06-16 |
| 公开（公告）号： | CN1566357A | 公开（公告）日： | 2005-01-19 |
| 发明（设计）人： | 张玫萍;曹纬 | 申请（专利权）人： | 上海赛达生物药业股份有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/00 | 分类号： | C12P21/00 |
| 代理公司： | 中原信达知识产权代理有限责任公司 | 代理人： | 罗大忱 |
| 地址： | 201203上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种重组改构人肿瘤坏死因子的生产方法，特别涉及一种采用通过菌种发酵和离子交换法制备重组改构人肿瘤坏死因子的方法。包括如下步骤：采用常规的方法进行裂菌，用Q－sepharose阴离子交换层析，用SP－sepharose阳离子交换层析。采用此生产工艺，单批生产300～400g菌体，可以获得800～1200mg的nrhTNF蛋白，纯度达到95％以上，比活达2～4×108IU/mg，活性回收率为80％以上，原液各项指标符合质量标准，取得良好的生产结果。与以往的生产方法比较，本项目的工艺路线简单，原液质量合格，工艺放大容易，操作周期短，因而优势十分明显。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 重组 改构人 肿瘤 坏死 因子 生产 方法 | ||
【主权项】：
1.一种重组改构人肿瘤坏死因子的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)采用常规的方法对发酵培养所获得的诱导表达菌进行裂菌获得TNF粗制品；(2)将步骤(1)的TNF粗制品，上样于用pH为8～9的缓冲溶液平衡的Q-sepharose阴离子交换柱，用平衡缓冲液淋洗至样品光吸收值至基线，用NaCl溶液线性洗脱，将目的峰产物用pH为7～8磷酸缓冲液透析，获得目的峰透析液；(3)将步骤(2)的目的峰透析液上样于SP-sepharose阳离子交换柱，用平衡缓冲液淋洗至样品光吸收值至基线，用NaCl溶液线性洗脱，收集目的峰产物，即为本发明的重组改构人肿瘤坏死因子。
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