[发明专利]白细胞介素－12的高效表达方法有效
| 申请号： | 03131567.4 | 申请日： | 2003-05-27 |
| 公开（公告）号： | CN1467292A | 公开（公告）日： | 2004-01-14 |
| 发明（设计）人： | 田志刚;刘文涛;魏海明 | 申请（专利权）人： | 中国科学技术大学 |
| 主分类号： | C12N15/24 | 分类号： | C12N15/24;C12N5/08 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 | 代理人： | 沈廉 |
| 地址： | 230026*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 白细胞介素－12的高效表达方法涉及一种由生物技术制备白细胞介素－12(IL－12)的方法，该方法分别将IL－12的P40亚单位编码区cDNA插入pcDNA3真核表达载体、将IL－12的P35亚单位编码区cDNA插入pEE14真核高效表达载体，分别构建了pcDNA3/p40、pEE14/p35两种真核细胞重组质粒，共转染宿主细胞后，在筛选培养基中同时加入G418和MSX进行筛选，挑取存活的阳性克隆，对各阳性克隆加压扩增，获得高表达IL－12的工程细胞株。该方法简便的利用IL－12 P40和P35天然表达不平衡的特性，采用两种表达效率不同的载体，以使两条链的表达尽量平衡。 | ||
| 搜索关键词： | 白细胞 12 高效 表达 方法 | ||
【主权项】：
1、一种白细胞介素-12的高效表达方法，其特征在于分别将IL-12的P40亚单位编码区cDNA插入pcDNA3真核表达载体、将IL-12的P35亚单位编码区cDNA插入pEE14真核高效表达载体，分别构建pcDNA3/p40、pEE14/p35两种表达效率不同的真核细胞重组质粒，共转染宿主细胞后，在筛选培养基中同时加入G418和MSX进行筛选，挑取存活的阳性克隆进行鉴定，获得高表达的IL-12的阳性克隆；用MSX对高表达的阳性克隆进行加压扩增，获得具有产业化价值的高表达IL-12的工程细胞株。
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