[发明专利]一种中国被毛孢液体菌种发酵工艺方法

摘要

本发明涉及中国被毛孢的液体菌种发酵工艺方法。该方法主要包括菌种的取得、一级固体三角瓶菌种培养、液体种子培养、液体发酵罐生产工序。本发明生产工艺简单、工艺稳定、易调控、成功率高。投资少，占地小、无三废问题。本发明工艺所用的菌株未发生明显变异。生产的菌丝体在液体状态下以断裂的菌丝片段为新生长点，在此基础上培养获得大量菌丝。生产的菌丝体可用于医药保健品，发酵液可制作口服液或饮料，从而最大限度地利用资源，追求更大的经济和社会效益。

主权项

1、一种中国被毛孢液体菌种发酵工艺方法，所述菌种为自青海采集的冬虫夏草〔Cordyceps sinensis(Berk)Sacc.〕子座分离出的RCEF0273菌株(Hirsutella sinensisLiu，Guo，Yu & Zeng)；它的液体菌种发酵工艺方法包括原料采集、菌株分离、菌种培养、保藏和多级发酵，其特征在于：(1)所述菌种培养分为二步：A、一级固体三角瓶菌种培养将分离纯化的菌种接种于50ml三角瓶培养基中，放入19℃培养箱，培养时间为20天，待菌丝长满三角瓶并产孢即可；B、二级液体摇瓶种子培养在500ml三角瓶中装入200ml培养基，用1.5pa/kg高压灭菌30分钟，待冷却至室温时，将经高速分散后的2瓶固体三角瓶的菌种接种到500ml三角瓶培养基上，并置于恒温振荡培养箱，温度19±1℃，180转/分条件下培养，培养时间为10天～12天；(2)所述菌种的发酵为三级液体菌种发酵：A、一级种子罐生产在50L气升式发酵罐中装入21L液体培养基，培养基温度大于95℃、pH值为6.0～7.0，并加入食用消泡剂，加入量为0.03％，在14.7×104Pa压力下，通入蒸汽加热到121℃，并保压30～45分钟；灭菌后，冷却至20℃时将4瓶上述培养好的500ml摇瓶种子接入培养，培养温度为19-20℃，通气量为1∶0.5V/V·min，保压4.903～7.0845×104Pa，经7天通气培养，达到对数生长期后即可，最终培养体积为30L；B、二级种子罐生产在500L种子罐中装入300L液体培养基，pH值为6.0～7.0，并加入食用消泡剂，加入量为0.03％，原位加热到121℃，在14.7×104Pa压力下，保压30～45分钟；灭菌后，冷却至20℃时，将一级种子罐的30L液体种子全部接入二级种子罐培养，培养温度19-20℃，通气量为1∶0.5V/V·min，保压4.903～7.0845×104Pa，经过7天通气培养，达到对数生长期后即可，最终培养体积为300L；C、发酵罐生产在5T发酵罐3中装入3T液体培养基，pH值为6.0～7.0，并加入食用消泡剂，加入量为0.03％，原位加热到121℃，保压40分钟，冷却至20℃，将二级种子罐培养好的液体种子300L全部接入发酵罐培养，培养温度为19-20℃，通气量为1∶0.4～0.5V/V·min，罐压4.903～7.0845×104Pa，培养时间5天；当发酵液中出现大量小菌球及经显微镜镜检发现大量菌丝，残糖在1％以下，发酵液较粘稠，颜色明显加深，可出罐。