[发明专利]动物钙调磷酸酶基因转化水稻并提高其耐盐耐寒性的方法

摘要

动物钙调磷酸酶基因转化水稻并提高其耐盐耐寒性的方法，它属于植物品种改良的生物技术。它有以下具体步骤：第一步：通过PCR方法获得去除C－末端自我抑制区的小鼠钙调磷酸酶催化亚基基因；第二步：采用质粒pCAMBIA1300构建植物表达载体；第三步：采用农杆菌介导法将该钙调磷酸酶催化亚基基因遗传转化到水稻中；第四步：分子杂交鉴定、可溶性总蛋白的提取和钙调磷酸酶活性分析；第五步：T1代转基因水稻幼苗抗盐、抗寒性分析。第六步：对水稻耐盐相关基因OsCDPK7和rab16A的表达进行分析。利用本发明的方法能够明显提高转基因水稻的抗盐，抗低温等逆境的能力，为培育高产、抗逆和优质水稻提供一种十分有效的方法。

主权项

1、动物钙调磷酸酶基因转化水稻并提高其耐盐耐寒性的方法，其特征在于有以下具体步骤：第一步：通过PCR方法获得去除C-末端自我抑制区的小鼠钙调磷酸酶催化亚基基因，PCR反应所用的引物是：p270：5′gcgccggtgcggtcggggtg tgca 3′；P271：5′gacactctca ctctcttctc tg 3′；第二步：采用质粒pCAMBIA1300构建植物表达载体，在本发明中，所构建的植物表达载体携带小鼠的去除C-末端自我抑制区的钙调磷酸酶催化亚基基因，该植物表达载体转化到根癌农杆菌EHA105中；第三步：采用农杆菌介导法将该钙调磷酸酶催化亚基基因遗传转化到水稻中，并得到了T0和T1代转基因水稻种子；第四步：当代(T0)转基因水稻叶片DNA提取和Southern blotting分子杂交鉴定，T1代转基因水稻幼苗叶片RNA提取和Northern blotting分子杂交鉴定，以及T1代转基因水稻幼苗叶片可溶性总蛋白的提取和钙调磷酸酶活性分析；第五步：T1代转基因水稻幼苗抗盐、抗寒性分析。第六步：对水稻耐盐相关基因OsCDPK7和rab16A的表达进行分析。