[发明专利]非特异免疫激活剂的制备方法

摘要

一种非特异免疫激活剂的制备方法，包括经厌氧发酵，从发酵液中分离菌体，获取菌体细胞壁中的非特异免疫激活制剂的过程。该发酵菌种是双歧杆菌DSM 20210，或双歧杆菌ATCC25866，或双歧杆菌ATCC25867，或双歧杆菌ATCC25525。获取该制剂的过程：(1).收集菌体；(2).裂解细胞；(3).四次洗涤离心除去裂解剂；(4).水解预处理；(5).酶解处理；(6).再次酶解处理；从而制成非特异免疫激活剂主料制剂或粗料制剂作为鱼、虾、贝类的饲料添加剂，用于激活养殖生物的非特异免疫力，达到促进对鱼、虾、贝类的抗病原生物的能力，促进鱼、虾、贝类的生长发育，提高了饲料转化率及水生养殖动物育苗期成活率。该激活剂干粉制剂作为水生脊椎动物注射用激活剂，可增强鱼类头肾细胞吞噬活力，增加抗病力。

主权项

1、一种非特异免疫激活剂的制备方法，包括经厌氧发酵培养，再从发酵液中分离收集菌体，获取菌体细胞壁中的活性非特异免疫激活制剂的过程，其特征在于：所述发酵培养的菌种是双歧杆菌DSM 20210，或双歧杆菌ATCC25866，或双歧杆菌ATCC25867，或双歧杆菌ATCC25525；所述获取菌体细胞壁中的活性非特异免疫激活制剂的过程是：(1).收集菌体：取发酵完成的菌液，经4000-8000g、4℃的离心处理20-30分钟，弃去上清液，保留收集的该菌体沉淀，再用0.8％生理盐水洗涤至该菌体为白色；(2).裂解细胞：按1∶4(g/ml)的比例，将白色的该菌体与细胞裂解剂混合，并置入95℃水浴中，恒温处理且连续搅拌1小时，再立即冷却至室温，并用双蒸水彻底洗涤；(3).四次洗涤离心除去裂解剂：用浓度梯度的甲醇水溶液对经(2).步处理的菌体，分别进行三次洗涤、离心处理，其中离心是以5000-6000g，分步按浓度梯度洗涤处理；之后用丙酮洗涤，且经4000-5000g的离心处理，再将收集的该菌体沉淀进行0～4℃的低温干燥处理；(4).水解预处理：将(3).中得到的干燥产物，按每500g该产物加1L的pH6.2磷酸盐缓冲液和0.3gEDTA液的比例，配制混合液，保持恒温80℃达4小时，再冷却至37℃；(5).酶解处理：向(4).中冷却的混合液中加入适量1-5g/L的溶菌酶，保持恒温37℃下作用24小时；之后补加1-3g/L的溶菌酶，37℃下处理12小时；(6).再次酶解处理：用适量2-5g/L的蛋白酶加入到溶菌的该混合液中，在50℃温度下处理24小时，即得到含有效活性浓度为0.4-0.8％的寡糖肽类和含有丙氨酸∶谷氨酸∶赖氨酸∶甘氨酸的摩尔数比＝3∶1∶1∶1的组合物，该组合物是具有淡甜香气味的黄褐色液体——非特异免疫激活剂主料制剂；或将该黄褐色液体干燥处理，即得到性状具有特殊甜香气味的，深褐色的粘稠物——含有效浓度为4-8％的寡糖肽类活性成分的和含有丙氨酸∶谷氨酸∶赖氨酸∶甘氨酸的摩尔数比＝3∶1∶1∶1的组合物——非特异免疫激活剂粗品制剂。