[发明专利]厚垣孢轮枝孢ZK7菌株的特异性分子标记及其应用

摘要

本发明涉及厚垣孢轮枝孢ZK7菌株的特异性分子标记及其应用，属分子生物学技术领域。本发明通过随机扩增DNA多态性(RAPD)PCR扩增技术对ZK7菌株和作为对照的同种不同菌株及土壤中常见真菌进行分子指纹分析和比较，获得ZK7菌株的RAPD特异性DNA片段Vc1200和Vc2000，进行回收、纯化，克隆和测序。根据该特异性DNA片段序列设计特异性SCAR－PCR引物，对施用ZK7菌株的自然环境土壤提取的DNA进行PCR扩增。同时将扩增出的ZK7菌株特异性DNA片段Vc1200和Vc2000进行地高辛标记制成杂交探针，利用标记探针对施用ZK7菌株的自然环境土壤提取的DNA进行斑点杂交，特异性检测ZK7菌株在自然环境土壤中的存在与否及其种群数量。本发明能快速进行分子鉴别和检测，为该菌株的生态学研究提供科学、高效的研究手段。

主权项

1、厚垣孢轮枝孢ZK7菌株的特异性分子标记，包括特异性DNA片段的获得、特异性DNA片段序列测定、特异性引物设计、地高辛标记制成杂交探针，其特征在于：1.1采用真菌是厚垣孢轮枝孢Verticillium chlamydosporium ZK7菌株为培养的菌丝体；1.2引物OPL-02(5′-TGG GCG TCA A-3′)扩增出一条大小约为1200bp的ZK7菌株特有的DNA片段，该片段命名为Vc1200；引物OPD-05(5′-TGA GCG GACA-3′)扩增出一条大小约为2000bp的ZK7菌株特有的DNA片段，该片段命名为Vc2000；1.3特异性DNA片段Vc1200碱基序列长度为1168bp，特异性DNA片段Vc2000碱基序列长度为1987bp；1.4扩增DNA片段Vc1200的特异性引物及碱基序列为：FVc1200(5′→3′)：TGG GCG TCA AAG GAG TGG CRVc1200(5′→3′)：TGG GCG TCA ATA CTT GAG AG；1.5扩增DNA片段Vc2000的特异性引物及碱基序列为：FVc2000(5′→3′)：TGA GCG GAC AGA GTG GAC TRVc2000(5′→3′)：TGA GCG GAC AAT AGA GCC GA。