[发明专利]应用胎儿脐血阻断血友病A致病基因传递的方法

摘要

本发明公开了一种应用胎儿脐血阻断血友病A致病基因传递的方法，其方法包括(1)样品制备，(2)离心，(3)筛选分型，(4)直接基因诊断，(5)阻断HA致病基因传递，(6)间接基因诊断，(7)阻断HA致病基因传递等步骤。本发明的方法具有采集标本方便，样品用量少，结果准确可靠，产前诊断率高的特点，能够有效地防止血友病A的误诊和漏诊，降低血友病A的发病率。

主权项

1.一种应用胎儿脐血阻断血友病A致病基因传递的方法，由以下步骤组成：(1)样品制备：选择有血友病A(HA)家族史的女性于妊娠20周后，在超声引导下经皮抽取胎儿脐带静脉血0.9ml或1.8ml，立即与O.1ml或0.2ml3.8％枸橼酸钠抗凝剂混匀，同时以相同方法和用量抽取携带者及其丈夫和正常人外周静脉血作对照；(2)离心：将上述样品于4℃条件下，以2400～2500转/分钟离心20～25分钟，取上层1/3～2/3血浆进行凝血因子VIII活性(FVIII：C)和血管性血友病因子(vWF)血清学的生化测定；取白细胞层提取DNA进行PCR联合基因诊断；(3)筛选分型：依据上述测定的血浆凝血因子VIII活性和血管性血友病因子浓度，确诊血友病A患者及其携带者，并根据血浆FVIII：C浓度将血友病A患者分为重型HA，其FVIII：C＜1％；中型HA，其FVIII：C1％～5％；轻型HA，其FVIII：C5％～25％、亚临床型HA，其FVIII：C25％～45％；(4)直接基因诊断：应用长距离PCR(LD-PCR)技术对上述样品提取的DNA进行产前基因诊断，根据电泳条带的大小和分子量的大小综合判定患者是否存在FVIII基因内含子22倒位；若只出现12Kb带，判为野生型即非倒位；若只出现11Kb带，判为倒位患者；若出现12Kb和11Kb两条带，判为倒位的携带者；(5)阻断HA致病基因传递：对于上述判为倒位的患者或判为倒位的携带者，应终止妊娠，切断HA致病基因的传递；(6)间接基因诊断：对上述非倒位的重型HA、中型HA和轻型HA家系，依次采用Bcl-I PCR/RFLP分析技术、基因内含子13(CA)n及内含子22(GT)n(AG)n二核苷酸重复序列多态性分析技术及与FVIII基因紧密连锁的可变串联重复序列多态性分析技术(St14/VNTR)进行间接基因诊断；(7)阻断HA致病基因传递：步骤(6)依次进行的各步基因诊断中，当样品判为HA患者或携带者时，终止妊娠，切断HA致病基因的传递；未作的诊断步骤停止。