[发明专利]一种有毒甲藻纯种的分离、与大规模培养方法

摘要

本发明涉及Amphi dinium klebsii的纯种分离途径、培养方法及其应用。具体地说是一种有毒甲藻的纯种分离与大规模培养的方法。海洋中能产生毒素的藻类约有60－78种，从目前的研究进展来看，甲藻毒素在研究癌症机理和开发抗癌、镇痛、麻醉、抗病毒、抗菌等各种治疗药方面有着非常广阔的应用前景。由于自然环境中有毒甲藻的细胞密度非常低，因而毒素原材料的来源困难，制约了它的应用。本发明的目的是研究一种有毒甲藻的纯种分离与培养方法。从自然水体中分离培养Amphidinium klebsii纯系，大幅度提高其增值率，达到该种的单种大规模生产的目的，以得到充足的原材料。

主权项

1、一种有毒甲藻(Amphidinium klebsii)的纯种分离与大规模培养的方法，其特征在于：A，藻种纯系的分离：1)，在热带珊瑚礁水域采集大型海藻，洗出附生物，收集上清部分，即得含(Amphidinium klebsii)藻细胞的水样；2)，分离的藻细胞，在培养液中建立藻株；3)，在实验室反复多次分离、驯化培养，重复步骤2)，分离纯化后得到(Amphidinium klebsii)的纯系；B，大规模培养方法：1)，原藻液2000ml，密度约200000cells/m1，在K培养液中平均生长约一周左右按1∶3比例扩种，先在体积为5升的三角烧瓶中进行扩种培养，大约五至七天后按1∶3扩种移至体积约20升的圆柱形玻璃缸中，继续分级扩种至体积分别为150升、250升和5000升内贴瓷砖的水池中进行大规模培养；2)，当扩种的藻液由淡黄色，最终转变为褐色乃至深褐色，此时分别用筛绢或滤纸或加用沉淀剂使藻细胞大量沉淀，收集沉淀并用400目的筛绢过滤藻液收集藻体，具体收集步骤如下：(1)在藻液中加入浓度为0.20～0.35‰的KAl(SO4)2·12H2O后搅拌；(2)用胶管抽去上清水体，收集沉淀于器皿中并逐级浓缩；(3)把沉淀的倒入分液漏斗中静置；(4)放出分液漏斗中的下层沉淀至孔径为400目的滤膜上，滤去多余的水分；(5)用药勺刮取筛绢上的藻膏至收集瓶中放置冰箱中冻存。