[发明专利]快速检测哈氏弧菌的试剂盒及检测方法

摘要

本发明涉及检测哈氏弧菌的试剂盒及检测方法。试剂盒包括：(a)DNA提取试剂：含缓冲试剂A和细胞裂解试剂B，(b)聚合酶链式反应试剂：包括反应预混试剂C和反应引物试剂D，试剂D中的特异引物对VP₀₁为5′－GCACCATGGGTTAAAAGCCGCT、VP₀₂为5′－AGAGAACTGACGCA CAACG TGGTTC，(c)电泳和显色试剂，包括试剂E和试剂F；检测方法包括(a).样品处理，(b).DNA提取，(c).PCR扩增，(d).电泳和显色检测，在紫外光下检测有一条480核苷酸对条带的为有哈氏弧菌感染或污染，反之则没有。本发明的优点和积极效果是检测快速，灵敏度极高。

主权项

1.一种快速检测哈氏弧菌的试剂盒，包括：(a)DNA提取试剂：含缓冲试剂A和细胞裂解试剂B，试剂A含有NaCl 0.1-0.3M、pH8.0的三羟基甲基氨基甲烷1-100mM、pH8.0的乙二胺四乙酸0.1-10mM和V/V浓度为0-20％的曲拉通X-100；试剂B含有浓度为1-10mg/ml的溶菌酶和pH8.0、浓度为1-100mM三羟基甲基氨基甲烷；(b)聚合酶链式反应试剂：包括反应预混试剂C和反应引物试剂D，试剂C含有10倍聚合酶链式反应缓冲液、热聚合酶和灭菌双蒸水，含量分别为2.5-5.0μl、0.5-2.5个单位和18-35.5μl；试剂D：包括特异引物对VP01和VP02、dNTP(四种脱氧核苷酸的混合物)及MgCl2，含量分别为0.2-1μM和0.2-1μM、20-200μM及0.5-10mM；VP01特指5′-GCACCATGGGTTAAAAGCCGCT；VP02特指5′-AGAGAACTGACGCACAACG TGGTTC(c)电泳和显色试剂，包括试剂E和试剂F，试剂E：为50倍电泳缓冲液，含三羟基甲基氨基甲烷-乙酸和乙二胺四乙酸，浓度分别为0.04M和0.001M；试剂F：含W/V为0.8-2％的琼脂糖和0.5-20μg/ml溴乙锭。