[发明专利]使用高速逆流色谱制订中药指纹图谱的方法

摘要

本发明涉及一种使用高速逆流色谱(HSCCC)制订中药指纹图谱的方法。该方法包括制备各批次中药材的粗提物；通过TLC确定主要化合物类型；选取HSCCC使用的溶剂体系；使用高速逆流色谱仪纯化中药材的粗提物；使用紫外检测器检测洗脱液，绘制各组份的紫外吸收与洗脱时间的关系图；通过HPLC和UV－Vis确定粗提物中各组份的对应性；判断共有指纹峰；综合中药指纹图谱方法学考察资料的数据即构成指纹图谱。该法首次将HSCCC应用于中药指纹图谱的制订，是对现有方法的重要补充，其精密度和重现性明显优于TLC，又解决了HPLC难以分析/分离高粘度和易填料吸附的样品以及仪器耗材昂贵的问题。

主权项

1、一种使用高速逆流色谱制订中药指纹图谱的方法，包括如下步骤：1)制备各批次中药材的粗提物：采用常规技术提取中药材，得到粗提物；2)确定主要化合物类型：通过薄层色谱法检测步骤1)得到的粗提物，确定中药材粗提物所包含的主要化合物类型；3)选取溶剂体系：根据步骤2)确定的主要化合物类型，从以下4类溶剂体系选取适用于HSCCC的有机相/有机相或有机相/水相溶剂体系：所述4类溶剂体系为：第一类为亲水性溶剂体系，由极性小的非水相与水相组成，两相极性相差很大；第二类为亲酯性溶剂体系，由高极性的非水相与水相组成，两相极性相差不大；第三类为有机相溶剂体系，完全由有机溶剂构成，包括体系1——正构烷烃/卤代烃/脂肪醇或脂肪酮、体系2——正构烷烃/醚类/脂肪醇或脂肪酮和体系3——正构烷烃/脂肪酯类/乙腈/脂肪醇或脂肪酮；第四类为双水相溶剂体系，包括：正己烷/乙醇/水，正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水，氯仿/甲醇/水，氯仿/甲醇/磷酸盐；4)使用高速逆流色谱仪纯化中药材的粗提物：将步骤3)选定的溶剂在分液漏斗中充分振荡，静置分层，分出作为固定相的那一层溶剂，将其加入高速逆流色谱仪的分离柱；剩余的一相作为流动相；在10～30℃，开启高速逆流色谱仪，采用主机正转或反转，主机转速为750～900rpm，并以1.5～2mL/min的流速将流动相泵入分离柱内，整个体系建立动态平衡，从进样阀注入步骤1)制得的某一批次中药材粗提物，各组分按其在两相中的分配系数分离开来；5)使用紫外检测器检测洗脱液，绘制各组份的紫外吸收与洗脱时间的关系图；6)在洗脱过程中，同时分别收集各组份，再通过其在HPLC上的保留时间和在UV-Vis光谱图上的峰值及形状确定各批次中药材粗提物的各组份的对应性；7)判断共有指纹峰，测量HSCCC中各共有指纹峰的保留时间，计算对应指纹峰的相对标准方差RSD，应满足RSD≤3％，非共有峰总面积不得大于总峰面积的10％；8)根据国家标准关于指纹图谱的方法学考察资料的要求，需对10个批次以上的样品进行检测；同一供试品连续进样5次以上，以考察仪器的精密度；同一批号的供试品5份以上，以考察实验方法的重现性；同一供试品在不同时间经HSCCC分离纯化，所得图谱的共有指纹峰的RSD应≤3％；最后这些数据即构成中药的指纹图谱及其方法学考察资料。