[发明专利]利用毕赤酵母生产高比活耐高温植酸酶

摘要

本发明公开了利用毕赤酵母生产高比活耐高温植酸酶。本发明采用多个同源植酸酶基因，利用DNA酶进行部分酶介，回收所有的DNA降解片段，在体外进行DNA分子重排，将所有重排DNA分子酶切后，构建到表达载体中，电击入大肠杆菌通过植酸酶表达及活性筛选突变植酸酶基因，最终获得高比活且耐高温植酸酶基因Phy XH，再构建成植酸酶基因表达载体pPhy XH电击转入毕赤酵母菌，挑选出植酸酶高表达重组酵母菌。

主权项

1、一种具有耐高温且高比活的编码如下的植酸酶基因PhyXH：GAGACTTCTCATTTGTGGGGTCAATACGCTCCATTCTTCTCTTTGGCTAACAAGTCTGCTATCTCTCCAGAT E T S H L W G Q Y A P F F S L A N Q S A I S P DGTTCCAGCTGGTTGTAAAGTTACTTTCGCTCAAGTTTTGTCCAGACATGGTGCTAGATACCCAACTGATACT V P A G C K V T F A Q V L S R H G A R Y P T D TAAAGGTAAGAAATATTCTGCTTTGATTGAGGAGATTCAACAAAACGCTACTACTTTTGAGGAGAAATACGCT K G K K Y S A L I E E I Q Q N A T T F E E K Y ATTTTTGAAAACTTACAACTATTCTTTGGGTGCTGATGATTTGACTCCATTTGGTGAACAAGAATTGGTTAAT F L K T Y N Y S L G A D D L T P F G E Q E L V NTCTGGTGTTAAGTTTTACCAAAGATACGAATCTTTGACTAGAAATATTGTTCCATTTATTAGATCCTCTGGT S G V K F Y Q R Y E S L T R N I V P F I R S S GTCTTCCAGAGTTATTGCTTCTGGTAATAAATTCATTGAAGCTTATCAATCTACTAAATTGAAAGATCCAAGA S S R V I A S G N K F I E A Y Q S T K L K D P RGCCCAACCAGGTCACTCTTCTCCAAAAATTGATGTTGTTATTTCTGAGGCITCTACTTCTAATAATACTGTG A Q P G H S S P K I D V V I S E A S T S N N T VGACCCAGGTACTTGTACTGTTTCTGAAGATAACGAATTGGCTGATGATTTCGAAGCTAATTTTACTGCTACT D P G T C T V S E D N E L A D D F E A N F T A TTTTGTTCCATCTATTAGACAATCTTTGGAAAATAACTTGTCTGGTGTTGCTTTGACTGATACTGAAGTTACT F V P S I R Q S L E N N L S G V A L T D T E V TTACTTGATGGACTTGTGTTCTTTTGATACTATCTCTACTTCTACTGTTGATACTAAATTGTCTCCATTTTGT Y L M D L C S F D T I S T S T V D T K L S P F CGATTTGTTTACTCATGAAAAATGGATTAATTATGATTATTTGCAATCTTTGAACAAGTACTACGGTCATGGT D L F T H E K W I N Y D Y L Q S L N K Y Y G H GGCTGGTAATCCATTGGGTCCAACTCAAGGTGTTTGTTACGCTAATGAATTGATTTCCAGATTGACTCATTCT A G N P L G P T Q G V C Y A N E L I S R L T H SCCAGTTCATGATTACACTTCTTCTAATCATATTTTGGATTCTTCTCAAGATACTTTTCCATTGAACTCTACT P V H D Y T S S N H I L D S S Q D T F P L N S TTTGTACGCTGATTTCTCTCTTAACAATGGTATTATCTCTATTTTGTTTGCTTGGGGTTTGAACAAAGGTACT L Y A D F S L N N G I I S I L F A W G L N K G TAAACCATTGTCTTCTACTACTGCTGAAAATATCACTCAAACTGATGGTTTTTCTTCTGCTTGGACTGTTCCA K P L S S T T A E N I T Q T D G F S S A W T V PTTCGCTTCCAGAATGTACGTTGAAATGATGCAATGTCAATCTGAACAAGAACCATTGGTTAGAGTTTTGGTT F A S R M Y V E M M Q C Q S E Q E P L V R V L VAATGATAGAGTTGTTCCATTGCATGGTTGTCCAGTTGATGCTTTGGGTAGATGTACTAGAGATTCTTTTGTT N D R V V P L H G C P V D A L G R C T R D S F VAGAGGTTTGTCTTTTGCTAGATCCGGTGGTGATTGGGCTGAATGCTTTGCTAAGGACGAATTGTAA R G L S F A R S G G D W A E C F A K D E L -通过PhyXH质粒载体整合入酵母菌获得能生产植酸酶的毕赤酵母工程菌。