[发明专利]制备感染松口蘑菌的幼松树的方法

摘要

本发明公开了一种通过共同培养无菌松树芽苗和松口蘑分离菌，制备感染松口蘑菌的幼松树的方法，该方法包括以下步骤：于PDB(马铃薯葡萄糖液体培养基，Difco)中液体培养天然存在的松口蘑蘑菇子实体并将分离自培养的子实体的松口蘑菌KBFERI 20T05接种；将珍珠岩和泥炭藓泥炭沼的混合土壤及K－液体培养基放置于接种的真菌上；将松树子在无菌下发芽产生的无菌芽苗种植到混合土壤中，然后与松口蘑分离菌一起培养松树芽苗以使在松树芽苗的细根上形成外生菌根。本发明的方法通过应用与已知常规松口蘑菌具有DNA同源性的真菌作为接种体，有利于为真菌接种体提供客观现实条件，并使整年大规模生产感染松口蘑菌的松树成为可能。

主权项

1、一种制备感染松口蘑菌的幼松树的方法，该方法包括以下步骤：将真菌菌丝体以0.01-0.02mg干重/mL无菌水的量接种于灭菌的培养容器的底部，所述真菌菌丝体通过将液体培养于PDB培养基的松口蘑子实体粉碎获得；将珍珠岩和泥炭藓泥炭沼以80∶1-2的比率混合并且将得到的混合土壤放置于接种的真菌菌丝体上；制备K-液体培养基，调整培养基的pH至5.5-5.6并将K-液体培养基平分至混合土壤上，所述K-液体培养基为每升水中含有：1.65g NH4NO3，0.2g KNO3，0.002g CaCl2·2H2O，0.02g KCl，0.2g KH2PO4，0.9g MgSO4·7H2O，0.2g(NH4)2HPO4，0.5g NH4-Tar，0.5ml Fe-Cit，0.031g H3BO3，0.01516g MnSO3·4H2O，0.0086g ZnSO4·7H2O，0.00083g KI，0.00025g Na2MoO4·2H2O，100μg盐酸硫胺，1.0g麦芽提取物，0.5g酵母提取物，0.3g酪蛋白和3.0g葡萄糖；在无菌条件下，使松树子发芽至3cm长，将得到的无菌芽苗种植于含有混合土壤和K-液体培养基的感染培养基上，并用盖子覆盖培养容器；并且将松树芽苗和松口蘑菌丝体在10-40,000lux光强度下于15-25℃共同培养24小时。