[发明专利]重组人红细胞生成素的分离纯化工艺

摘要

重组人红细胞生成素的分离纯化工艺，包括以下步骤：1.Blue sepharose.F.F层析；2.金属螯合亲和柱层析；3.Sephadex G－25柱层析；4.Source Q柱层析，收集目的蛋白峰经过0.22微米膜过滤。本发明是一种低成本的重组人红细胞生成素的生产方法。本工艺中不使用反相层析和有机溶剂，避免蛋白质在层析过程中发生变性和有机溶剂的残留。本工艺采用Blue Sepharose.Fast Flow金属螯和亲和层析，Sephadex G－25层析和Source Q层析顺序组合纯化工艺路线，可以大规模制备药用级的rHuEPO蛋白。

主权项

1.一种重组人红细胞生成素的分离纯化工艺，包括以下步骤：Blue sepharose.F.F层析：用PB缓冲液平衡Blue sepharose.F.F层析柱，用经过微米膜过滤后细胞培养上清上样，用PB缓冲液冲洗层析柱至基线，用20mM PB+0.75M NaCL缓冲液洗脱；金属螯合亲和柱层析用0.1M EDTA-Na2+1M NaCl平衡4.0C.V，用50％异丙醇+1％TFA平衡3.0C.V，用0.1M NaAc.HAC+0.2M CuSO4.5H2O平衡3.0C.V，用20mM PB+0.5M NaCl平衡3.0C.V，用Blue-Sepharose.F.F层析柱收集的洗脱蛋白峰上样用20mM PB+0.5M NaCl冲洗，收集穿透液；Sephadex G-25(Medium)柱层析(7.5×70cm)用注射用水冲洗3.0C.V，用20mMTris-HCl(PH7.0)缓冲液平衡层析柱3.0C.V，用金属螯合亲和层析柱收集的穿透液上样，用20mMTris-HCl(PH7.0)缓冲液洗脱，收集洗脱蛋白峰；Source Q柱层析(2.6×10cm)用20mMTris-HCl缓冲液平衡4.0C.V，用Sephadex G-25柱层析收集的洗脱蛋白峰上样，用50mM NaCl/20mMTris-HCl缓冲液进行洗脱杂蛋白，用150mM NaCl/20mMTris-HCl缓冲液进行洗脱目的蛋白峰，收集目的蛋白峰经过0.22微米膜过滤。