[发明专利]中华绒螯蟹蜕皮抑制激素1蛋白

摘要

本发明属于基因工程技术领域，所述的中华绒螯蟹(Eriocheir japonica sinensis)蜕皮抑制激素1(Ers－MIH 1)基因长度为3506bp，包括3个外显子、2个内含子、412bp的5′端上游调控区和917 bp的3′端UTR。根据Ers－MIH 1基因序列推导的多肽由75个氨基酸的成熟肽和35个氨基酸的信号肽组成。该成熟肽具有抑制中华绒螯蟹蜕皮的功能，从而对中华绒螯蟹的生长起重要的调控作用。Ers－MIH 1基因的GenBank检索号为AY310313。本发明利用Ers－MIH 1基因克隆制备融合蛋白，并利用该蛋白免疫动物制备多克隆抗体，同时将该抗体或该基因表达的控制用于解决养殖过程中出现的因蜕皮异常而致个体偏小的问题。

主权项

1、一种中华绒螯蟹蜕皮抑制激素1基因克隆制备的融合蛋白，其特征是以中华绒螯蟹蜕皮抑制激素1基因对应于外显子的核苷酸序列与质粒pGEX-4T-1制备成GST-Ers-MIH 1-pGEX-4T-1表达质粒，在无NaCL的LB中30～35℃培养到OD600为0.5，经IPTG诱导，破碎细胞后经GST亲和层析柱纯化，得到纯化的融合蛋白。该融合蛋白是Ers-MIH 1基因外显子编码的氨基酸，序列为：Met Val Ser Arg Ala Gln Ser Arg Phe Ser Ser Gln Arg Thr Trp Leu Val Ala Ala Val1 6 11 16Val Leu Ala Val Leu Cys Ser Phe Gly Val Gln Arg Ala Ala Ala Gly Ile Ile Asn Ala21 26 31 36Glu Cys Pro Asn Met Ile Gly Asn Arg Asp Ile Tyr Lys Lys Val Asp Trp Ile Cys Glu41 46 51 56Asp Cys Ala Asn Ile Phe Arg Ile Asp Gly Leu Gly Met Leu Cys Arg Lys Asn Cys Phe61 66 71 76Arg Asn Ile Asp Phe Leu Trp Cys Val Tyr Ala Ser Glu Arg His Ala Gln Lys Asp Asp81 86 91 96Leu Thr Arg Tyr Val Ser Ile Leu Gly Gln101 106