[发明专利]通过同源重组用于基因断裂的选择细胞的快速方法

摘要

本发明提供了用于真核细胞特别基因组位点的特异性改变的方法和载体。一种方法包含利用负－ATG(ATG－minus)荧光标记蛋白质基因靶向(AMFP)DNA载体，目的是为了产生和鉴别经过位点特异性同源重组把载体序列整合进宿主细胞基因组的细胞。该方法也包含利用编码体内可发现标记的序列，鉴别经过位点特异性同源重组或是非同源重组或是插入而把外源载体序列整合进了宿主细胞的基因组的细胞。本发明也包括在真核细胞内产生修饰的载体。另外，本发明包括通过实施和使用提供的方法和载体，从具备特异性遗传改变的细胞生成的细胞和有机体。

主权项

1.一种鉴定转化细胞的方法，该转化细胞经过利用AMFP载体进行了位点特异性同源重组，所述的方法包含：a)设计用AMFP载体转化的细胞以进行位点特异的同源/重组，其中所述的载体包括：实质上与宿主基因组的内源基因组序列同源的第一DNA序列；第二DNA序列，该序列编码在所述细胞中编码特征性缺乏调节因子和编码初始蛋氨酸的序列的荧光蛋白选择，并且与细胞内源性基因组序列非同源，因此不能进行位点特异性同源重组。实质上与宿主基因组的内源基因组序列同源，并且与第一DNA序列不同的第三DNA序列； b)通过选择存在所述第二DNA序列的功能性荧光蛋白可选择标记的基因产物，繁殖细胞以选择或富集那些用所述AMFP载体转化的细胞。 c)从没有所述第二DNA序列的细胞中分离具有所述编码功能性荧光蛋白可选择标记的第二DNA序列的细胞。