[发明专利]多波长中药色谱指纹图谱及其构建方法与应用

摘要

本发明涉及一种多波长中药色谱指纹图谱及其构建方法与应用，该方法通过色谱条件和紫外响应的考察与优化，确定在1～1.5小时洗脱时间下的梯度曲线和多个紫外检测波长用于指纹图谱测定并进行方法学验证；采用相对响应值和可定量峰作为定点指标进行相对化处理和矩阵化，建立量化多波长指纹图谱共有模式数据矩阵；对未知样品利用该矩阵进行相似度判别和成分差异比较，实现定性定量相结合的质量鉴别和评价。本发明的优点是不仅能从色谱的整体特征把握中药的品种和质量情况，而且通过多波长选取和指纹峰定性鉴定，能够更好表征中药的成分特异性，通过定量处理将主要成分量化，加强了指纹图谱对中药品种及其质量的表达能力和规范程度。采用本发明方法构建的中药色谱指纹图谱，可以广泛地应用于中药质量检测与评价技术领域。

主权项

1、一种多波长中药色谱指纹图谱的构建方法，其包括以下步骤：(1)将中药样品进行制备，在色谱预选流动相体系中进行粗分，对其中较强的紫外吸收响应进行识别和认定，根据识别和认定的结果，确定样品的多个检测波长并跟踪响应，测定多级洗脱比例下容量因子和对应流动相比例关系；(2)根据上述比例关系，确定在设定流动相体系下的梯度洗脱方法，进行实际样品测定，根据分离情况以及各个检测波长下色谱洗脱行为，进行整体优化，实时调整梯度洗脱曲线，最终按照跟踪响应的识别情况和容量因子分布，确定在1小时～1.5小时洗脱时间下的梯度曲线，从而确定该样品的指纹图谱测定方法；(3)对上述确定的测定方法进行有效性评价，其中包括专属性、准确度、精密度、重复性、稳定性、测定范围以及耐用性；(4)对不少于10批的实际样品进行测定，测定结果包括多个检测波长下的图谱及数据，对所述数据以保留时间纵向展开，对每个波长下所得相对峰面积值或峰高值进行一致性处理，建立测定样品的对应相对保留时间的相对峰面积值或峰高值的指纹图谱数据序列，对对应序列进行平均或取中位值，形成多个单波长下指纹图谱共有模式序列，然后进行多个波长下的数据整合，以所有全检测波长范围内可响应指纹峰对应的相对保留时间为列，各检测波长数据为行进行序列矩阵化，对应时间点无响应的位置以0填充，形成多波长指纹图谱共有模式数据矩阵；(5)对相同的中药样品采取多种制备方式制备或采取多种检测方法对相同样品进行测定，并分别重复步骤(4)，将得到的多个数据矩阵进行差异比较，在此基础上对步骤(4)所得的数据进行层次化；(6)对指纹图谱中的主要色谱峰进行指纹图谱定性；(7)对指纹图谱中的主要色谱峰进行指纹图谱定量。