[发明专利]模拟移动床色谱分离提纯银杏内酯B的方法

摘要

本发明公开了一种用模拟移动床色谱分离提纯银杏内酯B的方法。采用模拟移动床色谱和重结晶有机结合的方法，提高产品纯度和收率。本发明方法包括以下步骤：原料选择、萃取、模拟移动床纯化、重结晶和成品HPLC法检测。本发明与目前精提银杏内酯B的柱层析法比较，收率达64％、产量大，提纯所得银杏内酯B纯度大于90％。另外模拟移动床过程是连续过程，提高了生产的自动化水平和生产效率，并使生产环境得到极大的改善，真正实现了清洁生产。利用模拟移动床色谱、重结晶可实现精细分离规模化。

主权项

1、一种模拟移动床色谱分离提纯银杏内酯B的方法，其特征在于该分离提纯方法包括以下步骤：一、取水煮法获得的银杏浸膏，总黄酮24％、总内酯6％；二、每克银杏浸膏粉原料加入0.8-1.2L乙酸乙酯，在30-35℃下进行固液萃取8-10小时，过滤，滤液减压蒸干得银杏内酯粗提物；三、模拟移动床纯化(1)设备及条件选择采用模拟移动床色谱系统，该系统包括洗脱泵、进样泵、萃取泵、流量计、色谱柱、电磁阀、单向阀和PLC系统控制器及计算机组成，洗脱泵流量0-1000mL/min，压力0-10Mpa；进样泵流量0-30mL/min，压力0-8Mpa；萃取泵流量0-100mL/min，压力0-10MPa；工作温度20-25℃；(2)色谱柱填料及流动相选择填料为反相硅胶ODS，填料粒度30-40um，流动相为乙醇与水的混合物；(3)分离步骤a、样液的配制：以经过萃取所得银杏内酯粗提物为原料溶于乙醇中，沉降、0.45μm滤膜过滤，滤液浓度1-10g/mL；b、流动相的配制：乙醇∶水(V/V)＝5∶5；c、模拟移动床色谱参数：解吸段3根柱、精制段3根柱、吸附段2根柱，进样流速Uf＝8-12mL/min，洗脱泵流速Ud＝340-380mL/min，萃取液流速Ue＝230-250mL/min，残余液流速Ur＝118-142mL/min，切换时间ts＝14-18min；d、浓缩：残余液用薄膜旋转蒸发器浓缩至无水，用乙醇洗出后在真空干燥箱轰干，成为恒重的混合物；四、重结晶(1)乙醇重结晶所得恒重的混合物用0.8-1.5g/mL浓度乙醇溶解，冰箱冷冻放置，过4-8分钟后有白色沉淀析出，白色沉淀析出后再加4-7倍乙醇体积的水，静置1.8-2.5小时过滤，沉淀用水淋洗，白色沉淀真空烘干至恒重，得银杏总内酯；(2)甲醇重结晶用甲醇溶解乙醇结晶所得银杏总内酯，1g银杏总内酯用30-40mL甲醇溶解，超声使其完全溶解，室温下滴加4-5mL水，静置一小时后逐渐降温至零下10-18℃，结晶4-6小时，过滤，水洗晶体，结晶两次，白色沉淀真空烘于至恒重，得银杏内酯B产品；五、成品HPLC法检测岛津SPD-10AVP紫外检测器，Diamandsil ODS 4.6mm×250mm分析柱，流动相V(甲醇)∶V(水)＝65∶35，检测波长220nm，流速1mL/min，检测灵敏度0.0800AUFS，进样量20μL，检测温度：室温，由银杏内酯B、A、C对照品来确定产品中的组分并由标准工作曲线法标定银杏内酯B的纯度为90-95％。