[发明专利]残杀威人工抗原合成方法

摘要

本发明残杀威人工抗原合成方法属于有机化学及免疫学技术范畴。根据有机化学反应的一般原理，合成残杀威半抗原及抗原(包括包被抗原与免疫原)，方法，包括：邻－异丙氧基苯甲酰氯的合成，γ－氨基丁酸(H_残)的合成；残杀威人工抗原的合成，抗原于－20℃冰箱至少可以存放3年。此抗原具有稳定性好、免疫原性较强等特点。此抗原可制备出高效价、高亲和力的残杀威抗体。抗原制备技术简便可行：抗原的整个制备过程无需要特别的仪器设备，成本低廉，容易工厂化规模生产。

主权项

1、残杀威人工抗原合成方法，包括：1)邻-异丙氧基苯甲酰氯的合成：称取双光气27.1g，加入0.138g活性碳，37℃水浴加热，用50.0g甲苯收集光气，甲苯液在24℃水浴中磁力搅拌，尾气通入碱液，光气剧毒，且气味难闻，应在通风橱中进行，至双光气反应完，甲苯相增重24.0g，得34％光气/甲苯溶液；称取邻-异丙氧基苯酚11.056g，溶进100ml 10％的NaOH水溶液，40℃水浴加热磁力搅拌1小时，冷却到室温后缓慢加入上光气/甲苯溶液，40分钟加完，开始计时，4小时后结束反应；取有机相减压蒸馏得20.270g黄色油状物；GC法测定目标物的含量，5℃冰箱存放备用；2)γ-氨基丁酸(H残)的合成：称取间-甲基苯甲酰氯5.105g，溶进4ml4M NaOH溶液，置5℃冰箱冷却，得A液；称取γ-丁胺酸2.102g，溶进4ml 4MNaOH溶液，置5℃冰箱冷却，得B液；另取3ml 4M NaOH溶液，置5℃冰箱冷却，得C液；将A液与C液均分成5等份，每间隔5～10分钟向B液中同时各加入1份，整个反应置冰水中，磁力搅拌下进行；加样全部完成开始记时，3小时后结束反应；用浓盐酸调节反应终液的pH值为4，目标产物用乙酸乙酯3个50ml份抽提；乙酸乙酯相用稀HCl洗涤数次，用1MNaHCO3溶液2个50ml份抽提；水相再用浓盐酸酸化，乙酸乙酯再抽提；无水Na2SO4干燥，所得物减压蒸馏浓缩至13.8ml，向浓缩液中逐渐加入3lml正己烷，白色结晶物析出，过滤；结晶物经低温干燥得4.771g；再经过甲苯与去离子水5℃下洗涤，干燥后称重得到H残结晶物3.626g；3)残杀威人工抗原的合成：称取H残结晶物60mg和NHS 30mg，用600μl DMF溶解于反应装置中；称取55mg DCC，用600μl DMF溶解；将DCC/DMF溶液滴加到上反应装置中，反应在磁力搅拌下室内温度进行5小时，反应终液置5℃冰箱冷却2小时以上，经1.2万rpm离心5分钟，取上清活泼酯液并将其均分为2等份，分别缓慢滴加到3.0ml 10mg/ml的BSA溶液与3.0ml 10mg/ml的OVA溶液中反应，反应缓冲液为0.2M pH8.0的PB液，反应在磁力搅拌下室内温度进行4小时，将反应液置透析袋内，于0.2M pH6.8的PB中4℃搅拌透析，每4小时换一次透析液，共透析60小时，透析结束后将透析袋中的残杀威人工抗原白色乳状液装于若干1ml离心管中，于-20℃冰箱中存放备用。