[发明专利]注射用人胎盘核糖核酸的制备方法

摘要

本发明公开了一种注射用人胎盘核糖核酸的制备方法。该制备方法包括从人体胎盘提取核糖核酸的方法和配制注射用人胎盘核糖核酸的方法，从人体胎盘提取核糖核酸的方法包含以下步骤：配制试剂步骤；破碎粗提步骤；精提分离步骤和纯化步骤。本发明克服了现有技术存在的缺陷，具有制备的核糖核酸RNA活性高、纯度高、毒性小、更容易被人体吸收；制备方法操作简便，不需消耗大量的有机溶剂，制备周期短等优点。

主权项

1、一种注射用人胎盘核糖核酸的制备方法，其特征是：所述的制备方法包括从人体胎盘提取核糖核酸的方法和配制注射用人胎盘核糖核酸的方法，从人体胎盘提取核糖核酸的方法包含以下步骤：A、配制试剂步骤：配制0.1mol/l醋酸盐缓冲液、酚饱和缓冲液、缓冲液饱和酚、0.3mol/l醋酸盐缓冲液、0.1mol/l醋酸盐洗液和生理盐水；B、破碎粗提步骤：a、取新鲜或冰冻人体胎盘，用去离子水洗净，去除羊膜、脐带、大血管；b、将清洗后的胎盘组织剪碎，加4～6倍重量的酚饱和缓冲液和4～6倍重量的缓冲液饱和酚后，破碎得胎盘组织匀浆液；c、进行热酚处理，将匀浆液置于50～80℃水浴中搅拌10～20分钟后，迅速移入-20～-10℃盐水浴中速冷至0～10℃；C、精提分离步骤：a、将经热酚处理后的匀浆液进行离心分离，吸取上清液放入冰箱0～10℃保存，并收集离心分离出来的酚和蛋白层；b、加入酚和蛋白层重量的1/2～2/3倍量的酚饱和缓冲液，搅拌10～15分钟后，进行离心分离，吸取上清液与前“a”操作的清液合并存放，并收集分离出来的酚和蛋白层；c、加入合并清液重量的1/2～2/3倍量的缓冲液饱和酚，搅拌10～15分钟后，进行离心分离，吸取上清液，重复此操作，直至上清液和酚层之间无蛋白或极小量蛋白，收集上清液；d、取收集的上清液，按上清液重量的5％～8％的量加入醋酸钾，待醋酸钾溶解后加其重量的2～3倍量的-10～-20℃无水乙醇，静置于-20℃环境下8～14小时；e、进行离心分离，弃去上清液，收集沉淀即核糖核酸RNA粗制品；D、纯化步骤：a、将RNA粗制品按每100克加50～80ml的0.3mol/l醋酸盐缓冲液，使其溶解，进行离心分离，弃去沉淀物，收集上清RNA溶液，加上清RNA溶液重量的2～3倍量的-10～-20℃无水乙醇，置于-20℃环境中1～2小时；b、进行离心分离，弃去上清液，收集沉淀物，先加入等重量的0.1mol/l醋酸盐洗液搅成糊状后，再加入沉淀物重量的6～8倍量的0.1mol/l醋酸盐洗液搅匀；c、再次进行离心分离，弃去上清液，收集沉淀物，先加入等重量的0.1mol/l醋酸盐洗液搅成糊状后，再加入沉淀物重量的6～8倍量的0.1mol/l醋酸盐洗液搅匀，进行离心分离，弃去上清液，得RNA纯品后加等重量的0.1mol/l醋酸盐洗液保存在-20℃环境中；d、将保存的RNA进行离心分离，弃上清液，收集沉淀物即RNA纯品，吹干后，保存-20℃环境中。