[发明专利]一种开放式蛋白消减杂交方法

摘要

本发明涉及蛋白表达差异的分析方法，特别是直接在蛋白质水平上分析蛋白表达差异的方法。本发明通过构建DNA或RNA随机序列库（aptamer库），使之进入细胞体内结合相应特异性抗原蛋白分子。如果某蛋白分子有表达数量差异，那么其结合的特异性DNA、RNA序列或aptamer也会表现出相应的数量变化来，从而把在蛋白水平上的消减杂交转移到对DNA序列的消减杂交上来。从而达到了简捷快速的高通量筛选表达差异蛋白的目的。

主权项

1、一种开放式蛋白消减杂交方法，包括如下步骤：1)构建适体DNA或RNA随机序列库，与经过处理固定了的对照细胞和病理细胞在一致条件下孵化，然后洗去未结合或非特异结合细胞蛋白的DNA或RNA随机序列库；2)抽提上述细胞的蛋白质，用苯酚氯仿分离沉淀蛋白质，取含有DNA或RNA的上清液，用真空干燥机浓缩DNA或RNA或酒精沉淀DNA或RNA从而得到可反应蛋白水平变化的DNA或RNA随机序列库；3)对上步中得到的靶细胞和对照细胞的随机DNA或RNA序列库进行消减杂交后；PCR克隆消减序列以得到差异显示文库并测序，选取几个到几十个克隆，用标记引物扩增制备相应类型的DNA或RNA aptamer。利用该DNA或RNA aptamer筛选确定具有表达差异和功能差异的特异性蛋白。