[发明专利]一种抗SARS－CoV免疫球蛋白抗体及其制备方法

摘要

本发明涉及一种用于治疗、预防及诊断SARS－CoV的抗SARS－CoV免疫球蛋白F(ab′)2抗体，特征在于该抗体为马抗SARS－CoV免疫球蛋白F(ab′)2抗体，同时本发明公开该抗体的制备方法。本发明抗体能特异消灭SARS－CoV，对非典型肺炎的治疗和预防有很好的效果。

主权项

1、一种用于治疗、预防及诊断SARS-CoV的抗SARS-CoV免疫球蛋白抗体，其特征在于该抗体是的制备方法包括如下步骤：1)灭活纯化SARS-CoV加入不完全福氏佐剂乳化制备免疫原，采用皮下、肌肉、腹股沟淋巴结多点免疫经检疫符合生物制品要求的马匹，免疫四次、间隔10天免疫一次，试血测抗体效价对流电泳1∶128、间接酶联免疫1∶12800，测抗体中和效价细胞病变法1∶12800、空斑减数法1∶12800，并不同SARS-CoV标准株免疫马产生的中和抗体均与其它SARS-CoV毒株呈现一致的中和抗体活性；2)采集马抗SARS-CoV血浆，用无热源2倍蒸馏水稀释加入21％饱和度硫酸铵混匀、离心弃沉淀纤维蛋白和白蛋白，上清再加入9％饱和度硫酸铵混匀离心要沉淀免疫球蛋白G，用无热源蒸馏水恢复原体积再用30％饱和度硫酸铵混匀、离心要沉淀IgG，先加入一定量的无热源蒸馏水、后加入无热源0.9％氯化钠盐水用6万超滤器超滤除盐、浓缩和去杂蛋白，超滤液为纯化马抗SARS-CoV IgG；3)纯化的马抗SARS-CoV IgG用盐酸调PH至3.2后胃蛋白酶切割，再用氢氧化钠调PH至7.4，加热58℃、30min，用帆布过滤去Fc段，滤液为初步纯化马抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)2抗体；4)初步纯化的马抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)2抗体过苯基蔬水层析，用200mmol/L pH7.0磷酸缓冲液、1mol/L硫酸铵上柱，20mmol/L pH7.0磷酸缓冲液收集F(ab′)2抗体流出液，再用6万超滤器超滤除盐、浓缩，为纯化马抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)2抗体。