[发明专利]脂质体内皮抑素的制备方法

摘要

本发明属于脂质体内皮抑素的制备方法。结合旋转蒸发和冷冻干燥方法制备的内皮抑素脂质体粒径大小在150nm～180nm，蛋白包裹率是35～42％。在冻干状态下，内皮抑素脂质体在－20℃可以保存12个月，在4～8℃可以保存6个月，在20～25℃可以保存2个月。在内皮抑素脂质体重新水合形成胶体溶液时，在4～8℃稳定期为6d，在20～25℃稳定期为60h。该脂质体具有稳定性好、蛋白包裹率高、粒径大小均匀、操作简单、适合工业化大批量生产的优点。

主权项

1、一种脂质体内皮抑素的制备方法，将溶于氯仿的磷脂酰胆碱、胆固醇、磷脂酰丝氨酸和硬脂酸胺按摩尔比为15～20∶15～20∶2～5∶0.5～1.5混合，在36～40℃下减压旋转蒸发4～6h，旋转速度为80～120rpm，形成一薄层脂膜，以氮气流除尽残余痕量有机溶剂，加入2mL H2O继续以120rpm旋转溶解下脂膜，在20～25℃下浴式超声10～15min，形成多囊脂质体，室温下静置孵育1～2h，冰浴下进行探针超声，6～10×0.5min，每次间隔0.5～1min，悬液静置孵育2～3h，8000rpm离心10min，取上清液小单层脂质体，以0.22μm膜除菌过滤后，同4mg/mL内皮抑素溶液等体积混合，内皮抑素是通过基因工程方法在大肠杆菌中表达并经Ni-NTA Sepharose亲和层析柱纯化的重组人内皮抑素蛋白，加入脂质体冻干保护剂，冻干保护剂为6～8％海藻糖、0.6～0.8％明胶、0.5-1％人血清白蛋白、1.5～2％山梨醇、1％谷氨酸钠、1％尿素、0.5％抗坏血酸和0.2％L-精氨酸，在-45℃冷冻干燥8～10h，收获内皮抑素脂质体。