[发明专利]一种宝山堇菜组培快速育苗方法

摘要

本发明提供一种宝山堇菜(Viola baoshanensis)组织培养快速育苗方法。该方法选取野生宝山堇菜的叶片或叶柄为外植体，消毒后接种于添加的激素配比为0.5～1.0mg/L 6－BA+0.5～1.5mg/L NAA或0.5～1mg/L KT+1～1.5mg/L 2，4－D的MS诱导培养基上，诱导不定芽和愈伤组织生成，再经生根培养及炼苗、移栽，得到组培苗。繁育的宝山堇菜苗在培养基上和土壤中均能完成生活史，移栽成活率大于80％，从接种到驯化，周期2～3个月，繁殖系数高。利用本发明的方法，可快速、大量培育重金属超富集植物宝山堇菜。

主权项

1.一种宝山堇菜组织培养快速育苗的方法，具体步骤包括：1)外植体选择及消毒处理：选择叶片或叶柄为外植体，以0.1％HgCl2为消毒剂，消毒8～12分钟；2)不定芽诱导和愈伤组织生成：将经上述处理的外植体接种于如下之一的添加激素的MS基本培养基上诱导不定芽和愈伤组织生成：a.激素比为0.5～1.0mg/L 6-BA+0.5～1.5mg/L NAA，接种一周后有不定芽生成，不定芽生长迅速，接种2～3周后，不定芽高约2～3厘米；b.激素比为0.5～1mg/L KT+1～1.5mg/L 2，4-D，接种2～3天后有白色愈伤生成，3～4周后，生成明显的愈伤组织；愈伤组织接种于0.5～1.0mg/L 6-BA+0.5～1.5mg/L NAA配比的MS培养基上，接种1～2周有不定芽生成；3)生根培养：将上述获得的不定芽转接于1/2或1MS基本培养基上诱导生根；上述步骤2)和3)的培养条件为：光照12～14小时/天，温度22～25℃；4)炼苗与移栽：生根培养2～3星期后或待宝山堇菜苗长4～5cm，开培养瓶炼苗，移种于培养土中，在组培苗上罩以透明薄膜，维持70～80％的相对湿度，2～4天后取走透明薄膜，得到组培苗。