[发明专利]一种复合干扰素的纯化方法

摘要

本发明提供一种复合干扰素的纯化方法，包括如下步骤：将经常规方法发酵并收集的包涵体变性得到的复合干扰素，边搅拌边加入缓冲液D，然后在可以透过分子量50000以下的透析袋中，于缓冲液E中透析，进行复合干扰素蛋白质的复性；分出上清液，在装有强阳离子交换介质的层析柱上用缓冲液F和缓冲液G梯度洗脱，得到纯化的复合干扰素。本方法不仅能完全去除分子量在3～4万的杂蛋白，而且能将复性中间体与完全复性的蛋白基本分开，从而所得复合干扰素纯度高，产品结构也更均一。

主权项

1、一种复合干扰素的纯化方法，包括如下步骤：1)将经常规方法发酵并收集的包涵体变性得到的复合干扰素，边搅拌边加入缓冲液D，所加入的缓冲液D与复合干扰素的体积比为40～100∶1，然后将混合液静置过夜；2)将步骤1)经静置的混合液装入可以透过分子量50000以下的透析袋中，于缓冲液E中透析12～24小时，进行复合干扰素蛋白质的复性，缓冲液E与混合液的体积比为5～20∶1；3)从步骤2)经透析的混合液中分出上清液，得到复性的复合干扰素溶液；4)用缓冲液F平衡装有强阳离子交换介质的层析柱，介质装填高度为5～25cm，将步骤3)的已复性的复合干扰素溶液调pH至3.5～6.0后上柱，上样量不超过15mg/ml，然后用2倍柱体积的缓冲液F淋洗，再用5～10倍柱体积的含缓冲液G和缓冲液F的混合液进行梯度洗脱，淋洗时的流速为50～200cm/min，收集第二个蛋白洗脱峰时的洗脱液，最后将此洗脱液浓缩，得到纯化的复合干扰素；所述步骤1)的缓冲液D为100mM Tris、0.5M精氨酸和0.2mM乙二胺四乙酸二钠，用HCl调pH至8.3；所述步骤2)的缓冲液E为25mM Tris-HCl，pH8.3；所述步骤4)的缓冲液F为pH3.5～6.0的5～50mM磷酸氢二钠-磷酸二氢钠，柠檬酸-柠檬酸钠，磷酸氢二钠-柠檬酸，柠檬酸-氢氧化钠-盐酸，乙酸钠-乙酸或磷酸二氢钾-氢氧化钠；所述步骤4)的缓冲液G为1M NaCl溶于所述步骤4)的缓冲液F中；所述步骤4)用于梯度淋洗的混合缓冲液中缓冲液G占混合缓冲液总体积的10～60％。