[发明专利]动物细胞多孔微载体固定化高效培养方法及其培养基

摘要

本发明公开了一种动物细胞多孔微载体固定化高效培养方法，包括如下步骤：(1)纤维素多孔微载体预处理；(2)细胞接种：搅拌瓶中加入处理好的多孔微载体和含血清培养基，将细胞悬液按所需接种密度接种到搅拌瓶中培养；(3)细胞驯化：将生长在多孔微载体上的细胞悬液在搅拌瓶中逐级放大培养，并将培养基中的血清含量逐渐降到0％；(4)细胞培养：将细胞悬液转移至反应器中逐级放大培养，定期更新部分微载体，对细胞进行无血清培养。本发明的优点是：(1)细胞培养密度高；(2)可方便放大培养规模；(3)细胞培养时间长，一般可达100天左右；(4)无血清培养基价格低廉；(5)反应器的生产能力高；(6)适用于贴壁细胞和悬浮细胞的培养。

主权项

1、动物细胞多孔微载体固定化高效培养方法，包括如下步骤：(1)纤维素多孔微载体预处理：将纤维素多孔微载体用0.1mol/L、pH7.0的磷酸缓冲液(PBS)浸泡4h后，倾去PBS，再用PBS洗涤3次；121℃高压灭菌30min后，吸出PBS，用DMEM/F12培养基洗涤2次后置4℃备用；(2)细胞接种：搅拌瓶中加入处理好的多孔微载体和含血清培养基，将细胞悬液按所需接种密度接种到搅拌瓶中培养，培养条件为温度37.0℃±0.1℃，溶氧20％-40％，pH值7.0±0.05，转速20-100r/min；(3)细胞驯化：将生长在多孔微载体上的细胞悬液在搅拌瓶中逐级放大培养，并将培养基中的血清含量逐渐降到0％，培养条件为温度37.0℃±0.1℃，溶氧20％-40％，pH值7.0±0.05，转速20-100r/min，至细胞密度大于5×106细胞/mL，换液量一般为1/2-1个培养体积；(4)细胞培养：将细胞悬液转移至反应器中逐级放大培养，使用无泡通气供氧系统，采用批式换液连续培养工艺，定期更新部分微载体，对细胞进行无血清培养。