[发明专利]用于广泛检测工业产品中的生物体的一步实时RT PCR试剂盒

摘要

本发明涉及一种用于一步实时逆转录酶聚合酶链式反应(RT－PCR)的新的样本制备、探针、成对引物组，用于广泛检测药物、化妆品和非临床样本中的活细菌和/或真菌－酵母的方法和试剂盒。

主权项

1.用于检测在怀疑含有所述细菌和/或真菌的样本中存在的细菌或真菌-酵母核糖核酸(RNA)的方法和试剂盒，其中所述多核苷酸包含所选择的目标区域，所述方法包括：(a)在用DNA酶温育后，在膜和/或DEAE树脂上进行离心过滤，从多达1000ml的样本中提取细菌或真菌-酵母核糖核酸(RNA)，(b)在允许多核苷酸杂交到核糖核苷酸目标区域和所述聚合酶和用于cDNA合成的所述的DNA聚合酶的逆转录酶活性的条件下，用具有RNA依赖的逆转录酶活性和DNA依赖的聚合酶活性的热稳定性酶，使得在单一试管反应中进行RT和PCR，例如Tth DNA聚合酶，以及具有选自如下的核苷酸序列的多核苷酸引物来温育细菌或真菌-酵母核糖核酸(RNA)：Seq ID No 2 TGCGGGACTTAACCCAACA [反向引物]Seq ID No 4 TTACCCCACCTACTAGCTAAT [反向引物]Seq ID No 6 TTGCGCTCGTTRCGGGACTT [反向引物]Seq ID No 8 CGTTATCGCAATTAAGCAGACA [反向引物]Seq ID No 10 TTGGGTAATTTGCGCGCCTG [反向引物]以及(c)用所述DNA聚合酶以及具有选自如下核苷酸序列的多核苷酸引物和探针，通过聚合酶链式反应扩增cDNA到可检测水平：Seq ID No 1 TGGAGCATGTGGTTTAATTCGA [正向引物]Seq ID No 2 TGCGGGACTTAACCCAACA [反向引物]Seq ID No 3 AGAGTTTGATCATGGCTCAGA [正向引物]Seq ID No 4 TTACCCCACCTACTAGCTAAT [反向引物]Seq ID No 5 GYGGAGCATGTGGYTTAATTCG [正向引物]Seq ID No 6 TTGCGCTCGTTRCGGGACTT [反向引物]Seq ID No 7 GGGAAACTCACCAGGTCCA [正向引物]Seq ID No 8 CGTTATCGCAATTAAGCAGACA [反向引物]Seq ID No 9 GGTAACGGGGAATWAGGGTTC [正向引物]Seq ID No 10 TTGGGTAATTTGCGCGCCTG [反向引物]Seq ID No 11 TGCATGGYTGTCGTCAGCTCGTG [正向探针]Seq ID No 12 GAGTGGCGGACGGGTGAGTAA [正向探针]Seq ID No 13 ACAGGTGGTGCATGGTTGTC [正向探针]Seq ID No 14 TCAGCTCGTGTCGTGAGATGTT [正向探针]Seq ID No 15 ACAGGTGCTGCATGGCTGTC [正向探针]Seq ID No 16 TCAGCTCGTGTTGTGAAATGTT [正向探针]Seq ID No 17 AGGATTGACAGATTGAGAGCTCTT [正向探针]Seq ID No 18 CGGAGAGGGAGCCTGAGAA [正向探针]Seq ID No 19 CGGCTACCACATCCAAGGAA [正向探针]。