[发明专利]一种生产棉花植株的组织培养方法

摘要

本发明公开了一种通过发育同步化的体细胞胚发生在棉花中再生植株的方法。本发明简单、快速、重现性好并且便于应用于植物遗传工程中，通过肌醇饥饿步骤实现了同步化的体细胞胚发生。

主权项

1.一种通过体细胞胚发生、采用短期肌醇饥饿后基本同步化胚发育而再生棉花的方法，所述的方法包括下述步骤：(i)从萌发的棉花籽苗上切下外植体，该外植体选自子叶、下胚轴、中胚轴及其混合物；(ii)为了诱导愈伤组织，将所述外植体培养于第一固体培养基中，包含作为碳源的葡萄糖，补充了Gamborg B5维生素、2，4-D和BA以及肌醇的培养用培养基中，温度为23-33℃，光强度为至少90μmol/m2/s，光周期为16h，时间为3-5周，以使从所述外植体形成去分化的愈伤组织；(iii)将愈伤组织从第一固体愈伤组织诱导培养基转移至包括基础培养基的液体培养基中，该基础培养基包含作为碳源的葡萄糖，并补充了Gamborg B5维生素，然后将其产生的悬浮物在23-33℃、20-40μmol/m2/s降低的光强度、光周期为16h条件下培养足以形成胚发生团块的一段时间；(iv)通过不同筛孔尺寸的金属筛筛选所述细胞悬浮物，以选择胚发生细胞和/或团块，并将包含体细胞胚的所述胚发生愈伤组织传代培养于所述的基础培养基中；(v)将所述胚发生块/团块传代培养于所述的缺乏肌醇的基础培养基中一段足够的时间以让其经受肌醇缺乏，然后将该培养物返回到包含肌醇的培养基中，以使所述体细胞胚在发育上同步化；(vi)将双极的体细胞胚转移至支持物上的胚萌发培养基，然后让所述胚于胚萌发培养基中生长发育至足够能转移至土壤的幼苗期；(vii)进一步将所述幼苗转移至盆栽混合物中以适应环境，然后再转移至田间。