[发明专利]含多拷贝表达盒重组酵母表达质粒的快速构建方法无效
| 申请号： | 200410011044.0 | 申请日： | 2004-08-18 |
| 公开（公告）号： | CN1737154A | 公开（公告）日： | 2006-02-22 |
| 发明（设计）人： | 马鹤雯;张立树;连继勤;张永亮;张玉静 | 申请（专利权）人： | 马鹤雯 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N15/69 |
| 代理公司： | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 | 代理人： | 白冬冬 |
| 地址： | 130062吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | 一种含有多拷贝表达盒的重组酵母表达质粒的快速构建方法，属于生物技术领域。本发明选取一对同尾酶及限制性内切酶，再用两组限制性内切酶分别对重组酵母表达质粒进行限制性内切酶双酶切消化反应，分别回收含有表达盒的DNA片段，将回收的DNA片段进行连接，形成的阳性重组质粒即是含多拷贝表达盒重组酵母表达质粒。本发明同原始方法相比具有以下特点：①更先进可行；②操作更简便；③含表达盒的多拷贝串联物的获得过程由原来的随机获得改进为可人为设计和控制获得，由此使得重组酵母表达质粒中表达盒拷贝数完全符合实验人员的预期设计数目。 | ||
| 搜索关键词： | 拷贝 表达 重组 酵母 质粒 快速 构建 方法 | ||
【主权项】：
1、一种含有多拷贝表达盒的重组酵母表达质粒的快速构建方法，设酵母表达载体为V，含外源插入目的基因的表达盒为C，则含单拷贝表达盒的重组酵母表达质粒为V-C，其构建过程是：首先尽量靠近表达盒两侧边缘处选取一对同尾酶E2、E3，然后在载体非表达盒部分选取一个在重组酵母表达质粒中仅具有唯一识别序列的限制性内切酶E1；再用E1+E2和E1+E3两组限制性内切酶分别对重组酵母表达质粒V-C进行限制性内切酶双酶切消化反应，分别回收含有表达盒C的DNA片段，将两种回收的DNA片段进行连接，形成的阳性重组质粒即是含二拷贝表达盒重组酵母表达质粒V-2C。
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