[发明专利]口蹄疫复合多表位二价核酸疫苗的构建

摘要

一种口蹄疫复合多表位二价核酸疫苗的构建，属于生物技术领域。本发明的目的在于，以O型流行株NYOO和A型FMDV主要结构蛋白VP1基因为基础，以非结构蛋白3ABC及结构蛋白VP4上的Th2细胞表位为辅助基因，以真核表达质粒pVAX1为载体分子，构建针对FMDV O、A两血清型的二价复合多表位核酸疫苗，通过HeLa细胞转染实验及BALB/c小鼠免疫实验，表达所需的目的蛋白并进行免疫学指标的检测，以期获得针对不同血清型和不同流行株的安全高效复合多表位DNA疫苗，从而为有效预防FMD提供理论基础和疫苗储备。

主权项

1、一种口蹄疫复合多表位二价核酸疫苗的构建，其构建过程是：a、根据口蹄疫基因进化树分析，选择ME-EA型毒株作为基因来源，根据基因序列用DNAstar软件设计一对引物，以质粒pMD18-T-VP1为模板进行PCR扩增，获得O型FMDV免疫原基因VP1基因；b、通过GeneBank获得多个A型FMDV毒株VP1序列，经BLAST比较，选取A22毒株VP1全序列，在序列5’端添加柔性肽序列及酶切位点，在3’端添加终止密码子TAA，设计并合成了A型FMDV VP1序列；c、选择FMDV的3个Th表位基因，其中2个来自非结构蛋白3ABC，每个表位肽由15个氨基酸残基组成；1个来自高度保守的结构蛋白VP4，其长度20个氨基酸残基，三个表位拼接后合成150个碱基的多表位基因；d、将以上三个基因进行组合及串联，插入到真核表达质粒pVAX1载体启动子下游，分别构建了含O型和A型FMDV主要结构蛋白VP1基因、非结构蛋白3ABC及结构蛋白VP4上的Th2细胞表位基因的核酸疫苗的pVAX1-OA、pVAX1-OAT。