[发明专利]一种提纯活病毒的方法

摘要

本发明公开了一种提纯活病毒的方法。该方法包括制备抗宿主细胞的抗体，并用带有葡萄球菌蛋白A的琼脂糖珠对其纯化；再将该抗体与增殖病毒的细胞破碎体系混合，去沉淀即为初步纯化的活病毒；再用带有葡萄球菌蛋白A的琼脂糖珠与初步纯化后的活病毒悬液混合，去沉淀即为高度纯化的活病毒。该方法与传统纯化病毒的方法相比，具有分离产物纯度高、分离病毒活性高、操作简单、成本低廉、能有效放大等优点，可用于工业化生产和实验室研究。

主权项

1、一种提纯活病毒的方法，该方法包括下列步骤：A)抗血清的制备：以培养的宿主细胞破碎成分作为抗原与等量不完全弗氏佐剂混合，再按每1毫升上述混合物加入9-11mg卡介苗，制成乳白色悬液，免疫动物，制备抗宿主细胞的抗血清；B)抗体的初纯化：用饱和硫酸铵沉淀法自抗血清中提取含其他抗体和蛋白的初纯化抗体，并用0.1M NaHCO3/0.5M NaCl溶液将初纯化抗体稀释成4-6mg/ml的溶液；C)高纯度总抗体的制备：将初纯化抗体与带有葡萄球菌蛋白A的琼脂糖珠37℃共孵育，900-1100rpm/min，离心10-12min，洗涤后，再将偶联上的免疫球蛋白IgG洗脱下来并收集，实现总抗体的纯化；D)病毒的初纯化：将增殖的宿主细胞破碎成份体系用11000-14000rpm/min，4℃离心10-15min，取上清与抗宿主细胞抗体按体积1∶2混合，4℃，20-25转/分振荡过夜；将混合物以10000-13000rpm/min，4℃离心13-16min，弃细胞免疫复合物沉淀，收集上清液；E)病毒的纯化：将上清液与带有葡萄球菌蛋白A的琼脂糖珠于4℃孵育过夜，吸附抗体，900-1100rpm/min，离心10-12min，收集上请，即为纯化的病毒。