[发明专利]一种基因芯片上寡核苷酸连接检测基因突变的方法

摘要

本发明公开了一种基因芯片上的基因突变检测方法。其步骤是设计基因突变特异性寡核苷酸探针，制作基因芯片；进行芯片连接酶反应，在反应过程中引入生物素；连接反应完成后采用碱性磷酸酶复合物进行在片信号检测。本发明可对同一基因多个突变位点进行同步检测，对多个不同基因的突变情况进行检查，检测速度快，准确度和灵敏度高，操作简便，成本低，可用于细菌耐药性、遗传病等的临床检测。

主权项

1、一种基因芯片上寡核苷酸连接检测基因突变的方法，该方法包括以下步骤：A.根据目标基因序列，设计PCR引物，从临床样品中扩增目标基因片段；B.根据目标基因中的已知基因突变，设计突变特异性寡核苷酸探针与对应的信号检测探针，突变特异性探针的长度为5个碱基；对突变特异性探针的两端分别进行二硫化物和磷酸化修饰，对信号检测探针的一端进行生物素修饰；C.在普通载玻片上制作点阵，对载玻片进行巯基硅烷化修饰；固定突变特异性寡核苷酸探针；D.选用T4 DNA连接酶，以临床样品的PCR扩增产物为模板，以信号检测探针为液相探针，进行芯片连接酶反应；E.采用碱性磷酸酶-亲和素复合物，进行原位酶标信号检测，封阻液25℃-37℃封阻10-20分钟，甩干，亲和素标记碱性磷酸酶25℃-37℃作用10-20分钟，漂洗液漂洗两次，10-20分钟/次，甩干，加底物NBT/BCIP，25℃-37℃显色30-60分钟。