[发明专利]活体化学诱导鱼类雌核发育方法

摘要

活体化学诱导鱼类雌核发育方法属于鱼类细胞工程育种技术范畴，具体涉及到活体化学诱导育种的方法。它可以减少理化处理对染色体的损伤和提高人工诱导的雌核发育鱼达到性成熟年龄时的成活率与性腺正常发育成熟的百分率。其要点是：选择IV期中成熟期、卵母细胞核已偏心的腹部膨大、体表无损的健康雌鱼，对其依次注射催产剂和纺锤丝阻断剂，诱导染色体加倍；选择异种或同种体表无损、轻压腹部可挤出少量精液的健康雄鱼，对其注射催产剂，取精液与保存液稀释并加辐射处理，使之灭活；再将其与经诱导染色体已经加倍的鱼卵进行干法授精，即可诱发雌核发育和孵化出雌核发育的二倍体鱼苗；再进行倍性鉴定。本发明适用于两性生殖的卵生鱼类的人工雌核发育。

主权项

1.一种活体化学诱导鱼类雌核发育方法，包括化学诱导育种，其特征按以下工序进行：(1)产卵亲鱼选择，选择生殖腺处于IV期中成熟期，绝大多数卵母细胞核已偏心，停留在减数分裂前期的腹部膨大，体表无损的健康雌鱼，作为实验鱼；(2)体内化学诱导染色体加倍，对所选择的产卵亲鱼注射催产剂，当雌鱼卵母细胞经过第一次减数分裂进入第二次减数分裂中期，在采卵前4～8小时，对该鱼注射纺锤丝阻断剂，诱导染色体加倍；(3)精子遗传物质灭活，选择性成熟的异种或同种体表无损，轻压腹部可挤出少量精液的健康雄鱼，采精前注射催产剂；取精液，用汉克(Hank)精子保存液稀释；后将其置于培养皿中，在紫外灭菌灯下照射进行辐射处理，并不停地对培养皿进行摇动，精子遗传物质灭活时间是以精子遇水激活时大部分仍可缓慢游动为准，即可停止辐射处理过程；(4)雌核发育人工诱导，将遗传物质灭活的精子与经化学药物诱导染色体加倍成熟鱼卵进行干法授精，当卵子授予灭活精子后，将受精卵置于培养箱进行孵育，即可孵化出雌核发育的二倍体鱼苗；(5)倍性鉴定。