[发明专利]一种从伪枝藻中提取伪枝藻素的方法

摘要

本发明公开了一种从伪枝藻中提取伪枝藻素的方法。首先是配制伪枝藻培养液：采用磷酸氢二钾、硫酸镁、氯化钙、柠檬酸、柠檬酸铁铵、乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)、碳酸钠，微量元素溶液A₅按比例配制；其次是伪枝藻的培养：控制温度、光强、光质、培养液通气条件；第三是伪枝藻粉的制备；第四是伪枝藻素的提取；第五是伪枝藻素的收获与干燥。本发明方法易行、操作方便、设备简单、产量高、产品质量好、安全可靠，适用于工业化规模生产。

主权项

1、一种从伪枝藻中提取伪枝藻素的方法，包括如下步骤：A、培养液的配制：每升水加入磷酸氢二钾0.02-0.05g、硫酸镁0.06-0.09g、氯化钙0.02-0.05g、柠檬酸0.004-0.008g、柠檬酸铁铵0.004-0.008g、乙二胺四乙酸二钠盐0.001-0.003g、碳酸钠0.01-0.04g，微量元素溶液A50.5-2ml；B、伪枝藻的培养：首先是一级培养，由试管原种接入三角瓶中，通气培养，调节气流在1.5-3.5L.min-1，气流经过棉花球进行无菌处理，光强控制在65-85μE.m-2.s-1，温度控制在22-35℃，当培养5-10天后，转入到二级培养；其次是二级培养，将一级培养所得的培养物接入到培养瓶中，通气培养，调节气流在2.5-5L.min-1，无菌处理，光强控制在75-95μE.m-2.s-1，温度控制在22-35℃，当培养5-10天后，转入到三级培养；第三是三级培养，将二级培养所得的培养物接入到培养瓶中，通气培养，调节气流在3-6L.min-1，无菌处理，光强控制在70-100μE.m-2.s-1，温度控制在22-35℃，当培养5-10天后，为继续培养的接种种源；第四是继续培养，采用三级培养后的藻种，按每升培养液0.2-0.5g湿重的比例接入到开放式跑道循环培养池中，进行培养，采用玻璃温棚控制温度在28-30℃，利用自然光进行光照，光强控制在80-120μE.m-2.s-1，采用叶轮或潜水泵搅动培养基，在收获之前的3-6天内，每天两次采用UV-B照射，光强控制在120-160μE.m-2.s-1，每次时间在5-10分钟；C、伪枝藻藻粉的制备：将培养10-20天后的伪枝藻用泵抽到过滤装置——振动斜面筛上，经过振动斜面筛后，收得伪枝藻藻浆，然后将藻浆经过离心机离心，获得伪枝藻藻泥，经浓缩、脱水、干燥、粉碎后得到伪枝藻藻粉；D、伪枝藻素的提取：将藻粉在28-32℃下，加入8-12倍体积的无水甲醇，利用搅拌器不停地搅拌抽提30min，抽提2-3次，直到抽提液颜色很浅，在离心机中，5000-8000g离心10-15min，收集上清液，然后向沉淀物中加入乙酸乙酯，28-32℃下继续抽提，离心，收集上清液，与甲醇抽提液合并，然后向合并后的抽提液中加入其一半体积的蒸馏水，于-5--10℃下放置10-15分钟后，伪枝藻素沉淀便析出；E、伪枝藻素的收获与干燥：将上述含伪枝藻素的溶液于离心机中5000-8000g离心10-15min，收集沉淀物，-60--110℃下冷冻干燥。