[发明专利]一种水华蓝藻制备藻蓝蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种水华蓝藻制备藻蓝蛋白的方法，以鲜藻为原料，首先提取粗滤液，鲜藻脱水后，加入缓冲液，混匀，然后冰冻，冻结后，取出置室温下融溶，冻融3－5次，用板框过滤；其次是超滤纯化，用截留分子量为1000－20万道尔顿的中空纤维超滤器，经过微滤的粗提液使分子量较小的各种物质，透过超滤膜而被清除；第三是静置－澄清纯化，经过超滤纯化的藻蓝蛋白的部分，除去大部分小分子，同时进行浓缩，经浓缩的藻蓝蛋白部分在一定温度保藏；第四是羟基磷灰石柱层析纯化。本发明方法简便，纯化和浓缩效率高，具有社会、环境和经济效益。

主权项

1、一种水华蓝藻制备藻蓝蛋白的方法，包括下列步骤：A、从富营养化水体中收获水华蓝藻，经浓缩、脱水分后得到鲜蓝藻藻糊；B、提取蓝藻蛋白粗提液：取蓝藻鲜藻，经脱水后，按鲜藻与磷酸缓冲液重量体积比1∶1-1∶10的比例加入0.05M-0.2M的磷酸缓冲液，pH 5.0-9.0，混匀，然后置-10至-20℃，冰冻，待冻结之后，取出置室温20-25℃下使之融溶，冻融处理3-5次，然后利用板框过滤或离心分离法，使粗提液与细胞碎片相分离而得到蓝藻蛋白粗提液；C、微滤、预处理：上步骤的蓝藻蛋白的粗提液，依次通过孔径为2-3μm和0.45-0.22μm的二种微滤器，进行微滤处理，控制压力在0.02-0.1Mpa以下；D、超滤纯化工序：选用截留分子量为1000-20万道尔顿的中空纤维超滤器与蠕动泵配套使用，处理经过微滤处理的粗提液，控制超滤的流量为1-5升/分钟，通过超滤，小分子量的杂蛋白，小分子的有机物，多肽，及其它无机小分子，包括分子量1千的蓝藻毒素，均透过超滤膜而被清除，而藻蓝蛋白及其它大分子则滞留在超滤膜内，藻蓝蛋白的纯度得以提高；E、静置—澄清纯化工序：经过超滤纯化的藻蓝蛋白部分，除去了分子量，浓缩，将浓缩后的藻蓝蛋白部分在3-5℃保藏2-3天后，经过1000-5000g离心或过滤处理；F、羟基磷灰石柱层析纯化工序：将通过静置—澄清纯化工艺处理的材料上羟基磷灰石柱，使柱的1/3着染，然后用0.001M-1M不同浓度的磷酸缓冲液分步洗脱，按磷酸缓冲液浓度高低依次选用浓度梯度，磷酸缓冲液使用剂量为1-3个柱体积，通过洗脱，在0.125-1M浓度的磷酸缓冲液洗脱时，灰蓝色蛋白的别藻蓝蛋白才洗脱下来。