[发明专利]一种籼稻的离体培养方法

摘要

本发明属于新植物技术领域。公开了一种籼稻的离体培养方法。筛选得到一种适用于籼稻离体培养的愈伤组织继代培养基(J₃)和一种分化培养基(DL₃)。新的培养基含有大量成分、微量成分、附加成分、碳源和植物激素等组分。应用本发明的培养基和现有经典培养基，在四个有广泛代表性的、目前普遍推广的籼稻品种“明恢63”、“珍汕97B”、“中419”和“W9864S”组培材料上进行了对比试验。结果显示，本发明的籼稻离体培养方法和培养基，在籼稻愈伤组织的继代和再生方面明显优于同类方法和培养基，可以较好地克服籼稻品种离体培养和转基因应用中的困难。

主权项

1、一种籼稻的离体培养方法，其步骤包括：1)将去壳的成熟种子、幼胚或花药的籼稻外植体，置于75％酒精中清洗1分钟，0.15％升汞浸泡10-15分钟，无菌水漂洗，接入MS+2，4-D 2.5mg/L+谷氨酰胺300mg/L+脯氨酸500mg/L+3％蔗糖+0.3％植物胶(Phytagel)的培养基上，该培养基的pH为5.9，培养条件为26±1℃，暗培养，将所述的外植体诱导出愈伤组织；2)将步骤1)所得到的愈伤组织接入继代培养基培养，该培养基的组分为：KNO3 1900-2000mg/L，NH4NO3 1500-1650mg/L，KH2PO4 150-170mg/L，MgSO4·7H2O 350-370mg/L，CaCl2·2H2O 350-400mg/L，FeSO4·7H2O 35-42mg/L，Na2EDTA 50-56mg/L，MnSO4·4H2O 80-100mg/L，ZnSO4·7H2O 15-25mg/L，H3BO3 25-30mg/L，KI 6.0-8.0mg/L，CuSO4·5H2O 0.2-0.3mg/L，Na2MoO4·2H2O2.0-3.0mg/L，CoCl2·6H2O 0.2-0.3mg/L，甘氨酸2.0-3.0mg/L，VB1 0.5-1.0mg/L，VB6 1.0-1.5mg/L，烟酸1.0-1.5mg/L，肌醇100-150mg/L，谷氨酰胺300-500mg/L，脯氨酸500-800mg/L，2，4-D 2.0-3.0mg/L，麦芽糖30g/L，植物胶3.0g/L，pH为5.9，培养条件为26±1℃，暗培养，每隔20天继代一次；3)取步骤2)所得到的继代愈伤组织接入分化培养基，该培养基的组分如下：KNO3 2800-3000mg/L，(NH4)2SO4 350-450mg/L，KH2PO4 300-400mg/L，MgSO4·7H2O 180-200mg/L，CaCl2·2H2O 170-200mg/L，FeSO4·7H2O 45-55mg/L，60-74mg/L Na2EDTA，MnSO4·4H2O 80-100mg/L，ZnSO4·7H2O 15-25mg/L，H3BO3 25-30mg/L，KI 6.0-8.0mg/L，CuSO4·5H2O 0.2-0.3mg/L，Na2MoO4·2H2O2.0-3.0mg/L，CoCl2·6H2O 0.2-0.3mg/L，甘氨酸2.0-3.0mg/L，VB1 0.5-1.0mg/L，VB6 1.0-1.5mg/L，烟酸1.0-1.5mg/L，肌醇100-150mg/L，谷氨酰胺300-500mg/L，脯氨酸500-800mg/L，麦芽糖30-50g/L，6-苄基氨基嘌呤2mg/L，激动素2mg/L，吲哚乙酸0.2mg/L，萘乙酸0.2mg/L，植物胶5g/L，pH为6.0，培养条件为26±1℃，光照培养(16小时光/8小时暗)，再生出植株。