[发明专利]五种石斛种质鉴定特异性gDNA探针

摘要

本发明是以五种名贵石斛即迭鞘、鼓槌、流苏、铁皮、金钗为材料，以我们创立的“中药材gDNA序列特异性微阵列芯片制备方法”(专利申请号：03132205.0)筛选获得的特异性探针，用这些特异性探针制备成微阵列进行名贵中药材石斛不同品种的鉴别。这些探针的高特异性序列使其在进行杂交检测时，只与它所代表的品种的gDNA杂交，而不与其它四个品种杂交以达到鉴别不同品种的目的。这些特异性探针是在基因组(gDNA)水平上寻找获得的，不受生长发育和环境的影响，具有很高的遗传稳定性，能快速、准确鉴别不同品种的名贵石斛，对石斛的用药安全，质量控制，实现中药现代化具有重要的应用价值。

主权项

1.五种石斛特异性gDNA探针序列，其特征如下： 探针 编号 大小 (bp) 序列(5′→3′) 迭鞘1 151 CACACTGCCATCTCCCAGGAGGGAGAAAAAGGAGAAGGTCTGCTGCTGTCACCAGGAG GGTGACATAGCGTTTGGTATTCCGCCACACCGGGGGAGGTGAAAGGGAGTTTTGTAAAG GCTTCTCCGCCTTGCTGTGGGAGCAAAAGGAGAG 迭鞘2 159 TGCTGAAGAATTGACCGGTTCCTCCTGGGCCAGAAAGAAGCAGGCACATCCCCTTCTCT GTGACACACCCTGTCCACGCCCCTGGTTCTTAGTTCCAGCCCCACTCATAGGACACTCAT AGCTCAGGAGGGCTCCGCCTTCAATCCCACCCGCTAAAGT 铁皮1 399 TTAATTGATAATAAGCGAAAGGGAGTTTTGGGAGAGTAAGAGAGTTCTTGCAAGTGGAGA GTGTGAAGGGATCACATGGTTAATAAAAGGTAAGAACCTCTTTTTGTGATGTTAATTATCT TTCTTACTTATTTTAGTAATTAGAGAGAATAAATTTAGAGAAGACCTGGTTCTCTGCCAACA ACTGGACGGTGTGAAAGGATGGCGGTTCTCTACAGATAACAGGAGGGTGTGAAAGGATG ATAGTTCTCTGCCGACACTTAGAGGGTGTGAAAGGTTGACAGTTCTCTATTGAAAGTTAG AGGGTGTGAAAGGATGATGGTTCTCTACCGACACTTAGAGGGCGAGAAATGACAATGAT ACTCTGCCGACACTTGGAGGGTGTGAAAGGATGATGGT 铁皮2 359 AATACTGCACAGATGCGTAAGGAGAAAATACCGCATCAGATTGGCTATTGGCCATTGCAT ACGTTGTATCCATATCATAATATGTACATTTATATTGGCTCATGTCCAACATTACCGCCATG TTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCC CATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCA ACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCTCATAGTAACGCCAATAGGGA CTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGT 金钗1 453 AGACTGAACCAGAGGAAGAGACTACGAATCTGTGTTTTTATGGGAGAAAATCAAAGTGAT GAGGAAGAGGTGTGTAAATCAACCTATGATGAGTTGTTTGAAATTTGTGAAAAAATCCATG CATCATACAAAAAACTTAAGAAGACTCATGCTAGTCTAAAATTAGAACATTCAAATCTACAA AAAGAGCATGAAGTTTTTCTCAAAGATCATGCAACGATTGATACAAATCTCATGGCTCTTC TTGATGAATTTGATGAGTTGAACAAAAAGCATTTAGAATTAGTTGATGAACATAATGCATTA AAATATTCACACACCTCACTTAGTTTTGATCTTAAGAAATCTGAAGAGATTGAGAAAAATTT GAGGATTGAGATTGATGCATTAAAAAGAACAAATTTGAGGATTCAAAATGATTTTGATACA TATAAGAAAAATCTGATGACTTCT 金钗2 163 GTGGAGTTGGGGTGGGCAGGCTCATTTGGGATATATATACGAAAGACAAGAAAAACTATT CTGAAATGTCAATTCGCAACGTATGTTGGCCGTGCATCGTCCCGGTCCGATCATGGGTCA GCCAGGAAGAGTCTACTTAATTGCTGTTGAACGGAACCCACTT 鼓槌1 83 TAACCGTAGGCACAGCACCTCTTTTGAGATCATTGGATATTCTCGACTCTGACTTTGCGG GGTGTAGGGTGGATAGGAAGAGT 鼓槌2 120 CACAATGTCTCCTCTACTGCACCCCGGCATAGTCAGAATCAGAGTATCCAATGATCTCAA AAGAGGTGCTGTGCCTAGGGCACCTCGGCCGCGACCACGCTTAATTATTCCATCTGACG T 流苏1 255 GCCTTCGCTTGGGCTCAGGAATGTCCACCTTCCATTTATTTTACACTAAACCCAAGAAAGT AATTAAGTTCTCCCATCATACTTATTTCGATCTCATCACTCATTATTTTTAAAAATTCATCAC ATACGGTTTTCTTTGAGGATCCAAAAAAGATGTCATCTATATAAATCTAAACAATGAGTATT TCATCTCCTACCTTTTTTAAGAAGAGGGTGGTGTCCATACTATCCTTAACAAAGCCTCTAT CTAGCAGG流苏2 251 GATTCACTTAGCAAATTAAACTTGTTCTCCCCTAGACCACATTTGTCCAACTTATGGTCCG TTCAAACAACATCAACACCAGTCGAAACAATTGGCACAGCTTCAGCTAACACCGGGTTAG AGTCATCACTCTTATTGCTATAAGGAGGAGGACCATTAGATTCCAAAATACTGCTAGGATG AGCTTCCTCAATAATCCTAGCAATGTCATGTTTTTGATTCACCTTACGATCCTTATCTATAA AAGAAGT以上特异性探针与用五种石斛gDNA制备的微阵列杂交，杂交结果如图1。尼龙膜上点样的gDNA从左到右各列依次为迭鞘(D.aurantiacum Kerr)，铁皮(D.officinale Kimura et Migo)，金钗(D.nobile Lindl.)，鼓槌(D.chrysotoxum Lindl.)，流苏(D.fimbriatum Hook.)；