[发明专利]利用幼胚拯救获得菊属远缘杂种的方法

摘要

本发明利用幼胚拯救获得菊属远缘杂种的方法，属于生物技术育种领域。选择原产我国的菊属二倍体野生种菊花脑与栽培菊花品种六倍体‘黄英’杂交，采用子房培养手段进行幼胚拯救，对获得的后代材料同时进行杂种RAPD鉴定、杂种细胞学鉴定、杂种形态学鉴定，选择扩增谱带中出现母本不具有的父本特异带或双亲均不具有的带、染色体倍性为四倍体、茎、叶、花序等形态学特征介于双亲之间、出现父本特异性状或双亲不具有的新的性状的后代材料，即为获得的种间杂交品种，实现了菊属种间远缘杂交，创造了一批新种质。

主权项

1、利用幼胚拯救获得菊属远缘杂种的方法，包括；1)菊属种间杂交后代材料的的获得选择原产我国的菊属二倍体野生种菊花脑(D.nankingense)，栽培菊花品种六倍体‘黄英’于温室内进行杂交，以二倍体野生种菊花脑为母本进行人工去雄并套袋隔离，父本栽培菊花‘黄英’在舌状花微开时套袋，于上午9～10时或下午3～4时授粉，同一花序重复授粉2次；杂交后采用子房培养手段进行幼胚拯救，接种时取杂交授粉后13～18d的头状花序，剥取边缘舌状花的子房，以75％酒精表面消毒30s后置于0.1％(质量比)的升汞溶液中灭菌5min，无菌水冲洗4～5次后用接种针将子房接入MS添加KT2.0mg/L，IAA2.0mg/L；BA2.0mg/L，NAA2.0mg/L的培养基上，每瓶接种子房15～20个，每处理重复12～18瓶；30d后转入继代培养，继代培养基为MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，得到幼苗后转入MS+BA0.2mg/L的培养基中扩繁，在MS添加NAA0.1mg/L的培养基上生根，培养温度20～25℃，每日光照10～12h，光照度1600～2000lx，获得菊属二倍体野生种菊花脑与栽培菊花品种六倍体‘黄英’的种间杂交后代材料；2)菊属种间杂种的鉴定对获得的后代材料同时进行杂种RAPD鉴定、杂种细胞学鉴定、杂种形态学鉴定，其中在杂种RAPD鉴定时，对获得的种间杂交后代材料进行分子标记鉴定，提取父母本及后代材料的DNA，然后进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳，获得扩增谱带；在杂种细胞学鉴定时，对后代材料进行染色体减数分裂观察；在杂种形态学鉴定时，对杂交父母本及后代材料的形态学进行观察与统计；选择扩增谱带中出现母本不具有的父本特异带或双亲均不具有的带、染色体倍性为四倍体、形态学特征为株高27～40cm，冠径44～60cm，分枝性中等～强，叶长4.6～6.8cm，宽3.0～4.7cm，叶裂中等～深，有托叶，茎紫色，茎及叶片上被绒毛；花序直径1.8～3.2cm，黄色，初开9月10～20日，盛开9月23日～10月15日，舌状花17～23，管状花77～116的后代材料，即为获得的菊属二倍体野生种菊花脑与栽培菊花品种六倍体‘黄英’的种间杂交种。