[发明专利]骨髓间充质干细胞的规模化制备方法

摘要

本发明公开了一种骨髓间充质干细胞的规模化制备方法。具体包括如下步骤：1.MSCs分离培养，2.MSCs的微载体系统悬浮培养，3.收获细胞。采用本发明的方法，可以消除常规静态培养系统中的面积限制以及营养物、代谢副产物的浓度梯度，避免了频繁的传代操作，有利于细胞生长和保持干细胞特性，采用生物反应器培养，可收获1×10⁹细胞，真正实现规模化制备骨髓间充质干细胞，为工程化组织构建、细胞治疗、基因治疗或其它科学研究提供大量的种子细胞。

主权项

1.一种骨髓间充质干细胞的规模化制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)MSCs分离培养将从骨髓细胞悬液中分离的单个核细胞，接种在添加了5％～20％胎牛血清的α-MEM中进行原代培养，12～48小时后更换培养液，除去未贴壁细胞，原代细胞长至汇合后以0.25％胰酶+0.02％EDTA消化细胞；(2)MSCs的微载体系统悬浮培养细胞接种于预先硅化过的搅拌悬浮培养装置中，与CT-3微载体共同培养，采用10～30rpm转速进行接种，6～24小时后提高转速至20～80rpm进行培养，培养条件为37℃、5％CO2、饱和湿度，生物反应器系统设定操作条件为：pH7.0～7.2，温度37℃，溶氧为30％～50％空气饱和度；(3)收获细胞细胞长满微载体后，以胰酶或胶原酶消化微载体表面包被的胶原，使细胞从微载体表面脱落下来，通过静止沉降法分离微载体和细胞。