[发明专利]一种诱导骨髓基质细胞定向分化的方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种诱导骨髓基质干细胞定向分化为神经干细胞、神经前体细胞或神经细胞的方法。本发明方法通过骨髓基质细胞分离、纯化和培养，及诱导、分化，经形态学和免疫细胞化学染色证明，采用脑源性膜信号相关物质一神经节苷脂能高比例地诱导骨髓基质细胞定向分化为神经干细胞、神经前体细胞或神经细胞诱导骨髓基质干细胞。经诱导后的神经前体(干)细胞、神经细胞经静脉输注移植或脑内移植具有治疗帕金森病或综合征、中风及其后遗症、脊髓损伤及其后遗症、阿尔茨海默病(老年性痴呆)等作用。具有广泛临床应用前景。

主权项

1、一种诱导骨髓基质细胞定向分化的方法，其特征是，在无血清条件下，采用神经节苷脂诱导骨髓基质细胞定向分化成神经前体(干)细胞和神经细胞，包括下述步骤，1)骨髓基质细胞分离、纯化和培养无菌条件取实验动物股骨，用d-Hank’s液冲洗骨髓，收集冲洗液并制成单细胞悬液、离心。用含20％胎牛血清的DMEM培养液悬浮沉淀的细胞、接种于培养瓶，37℃、5％CO2、饱和湿度培养箱培养。当骨髓基质细胞达80％融合时，用0.25％的胰酶消化传代。以第四~六代骨髓基质细胞进行定向诱导、分化；2)、MSCs定向诱导更换培养液2天后换液并添加0.01~100mMol/L的神经节苷脂，分别诱导；3)、MSCs和诱导细胞形态学观察；4)免疫细胞化学染色诱导细胞分别用巢蛋白、NSE、GFAP抗体进行细胞免疫荧光染色。