[发明专利]人肝癌转移亚克隆细胞系及其建立方法

摘要

本发明公开了一种人肝癌转移亚克隆细胞系及其建立方法，所述人肝癌转移亚克隆细胞系是用下述方法建立的：将人肝癌细胞H7402单细胞悬液接种于SCID鼠；确认转移部位为肺脏；原代培养；传代培养，当细胞传代到第三代以后，将培养液中的胎牛血清浓度降为10％，细胞生长良好，形态逐渐均一，即建立了一种来源于亲本人肝癌细胞H7402的肝癌转移亚克隆细胞系，并与亲本细胞形成配对关系，为肝癌细胞转移的研究提供新的实验材料；可用于筛选肝癌转移相关基因；可用于筛选肝癌转移相关蛋白；可用于筛选抗肿瘤转移药物；可用于肿瘤转移分子机理的研究；可用于进行肿瘤转移DNA疫苗的研究。

主权项

1.一种人肝癌转移亚克隆细胞系，其特征是所述人肝癌转移亚克隆细胞系与亲本细胞系H7402形成配对关系，所述人肝癌转移亚克隆细胞系是用下述方法建立的：(1)接种SCID鼠：将对数生长期的人肝癌细胞H7402单细胞悬液，细胞数量为1～4×107/0.2ml接种于经Cs137γ射线照射过的SCID鼠腋背部皮下；(2)确认转移部位：将荷瘤SCID鼠处死，对各个组织的病理切片进行显微镜下观察，确定其转移部位为肺脏；(3)原代培养：在接种人肝癌细胞H7402后55-67天，将荷瘤SCID鼠处死，无菌解剖，取出肺脏，进行原代培养，方法如下：用pH7.2的D-Hanks生理缓冲液漂洗组织块3次，去除血液、脂肪、神经组织、结缔组织和坏死组织；将肺组织剪切成0.5-1.5mm3小块；接种细胞培养瓶中，使瓶底向上，在37℃孵箱内，空气中含体积百分比为5％的CO2条件下培养；2-4小时后，向培养瓶内加入8-10ml内含20％胎牛血清的RPMI1640培养液，静置培养，原代培养每3天换液一次，待从组织块生长出大量的贴壁细胞，去除已漂浮的组织块和残留的血细胞；(4)传代培养：将去掉组织的细胞进行细胞传代培养，具体步骤如下：移去原代培养的培养瓶内的细胞培养液，向培养瓶中加入2ml质量体积百分比为0.25％胰蛋白酶溶液，置37℃孵箱中2-3分钟，观察到细胞出现回缩、细胞间隙增大，吸除胰蛋白酶溶液，加入8-10ml内含20％胎牛血清RPMI1640培养液，使之形成细胞悬液，计数，接种于新的培养瓶，当细胞传代到第三代时，加入的RPMI1640培养液内含胎牛血清为10％，细胞生长良好，形态逐渐均一，即建立了一种来源于亲本人肝癌细胞H7402的肝癌转移亚克隆细胞系。