[发明专利]从蛇毒中提取降纤酶及降纤酶水针制剂的制备方法

摘要

本发明公开了一种从蛇毒中提取降纤酶及降纤酶水针制剂的制备方法，从蛇毒中提取降纤酶的制备方法，它包括下述步骤：单克隆抗体的制备；降纤酶粗品的制备；抗体亲和层析柱的制备；降纤酶的制备；降纤酶水针制剂的制备方法，它包括下述步骤：取纯化的降纤酶，将其加入到适量的注射用水中溶解，得溶解液，在每1000ml溶解液中加入5－20g氯化钠稳定剂，分装，即得降纤酶水针制剂。本发明降纤酶制备工艺简单，适合规模化生产，水针制剂稳定性高，并可长期保存。

主权项

1.从蛇毒中提取降纤酶的制备方法，它包括下述步骤：1).单克隆抗体的制备：将纯化并定性的从蛇毒中提取的降纤酶(1g/L)与等体积的完全佐剂混合乳化后，给动物免疫；然后用Koher方法取免疫的动物的脾细胞，将所取的免疫动物脾细胞制成细胞悬液；将所得的细胞悬液与相同动物的骨髓瘤细胞按(8-15)∶1的比例混合，在30-80％聚乙二醇作用下融合得融合体；将融合体进行选择性培养，首先筛出能分泌与预定抗原起反应的单抗的杂交瘤细胞，进而从中筛出有预定特异性的杂交瘤细胞，最终选出可供实际应用且具有稳定生长和功能特异的均一细胞克隆，以腹水法获得单克隆抗体，纯化后备用；2).降纤酶粗品的制备：取蛇毒，将蛇毒经离子交换层析法初步纯化，得初步纯化的降纤酶粗品，备用；3).抗体亲和层析柱的制备：3.1 取琼脂糖作为亲和层析的载体，用适量的溴化氰活化该载体，得活化的琼脂糖；3.2 取已纯化的单克隆抗体溶于硼酸缓冲液中，过滤后加入亲和层析柱内，然后加入活化的琼脂糖，在5-20℃下搅拌反应15-25小时，得具有特异亲和能力的分离介质；3.3 装柱即得到抗体亲和层析柱，备用；4).降纤酶的制备：将经离子交换层析法初步纯化的降纤酶粗品逐渐加入到抗体亲和层析柱中，待流出液在检测仪上绘出稳定的基线后，改用亲和层析洗脱液洗脱活性组分，收集洗脱峰，使被吸附的生物活性物质从亲和介质上解吸下来，测定酶活性，冷冻干燥后即得纯化的降纤酶成品。